| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-23页 |
| ·乳酸的理化性质、功能和用途 | 第11-12页 |
| ·乳酸的理化性质 | 第11页 |
| ·乳酸功能和用途 | 第11-12页 |
| ·生产概况及需求 | 第12-13页 |
| ·微生物发酵法合成乳酸 | 第13-16页 |
| ·乳酸发酵机理 | 第13-14页 |
| ·乳酸发酵菌株 | 第14-16页 |
| ·L-乳酸生产菌株的选育 | 第16-20页 |
| ·理想中优良L-乳酸菌株应具有的特性 | 第17页 |
| ·利用诱变和定向筛选相结合选育L-乳酸生产菌 | 第17页 |
| ·原生质体融合育种 | 第17-18页 |
| ·基因工程育种 | 第18-20页 |
| ·本文主要技术路线 | 第20-23页 |
| ·L-乳酸工程菌构建的出发菌株选择 | 第20页 |
| ·插入片段的选择 | 第20-21页 |
| ·基因工程改造技术的选择 | 第21页 |
| ·本文主要内容及技术路线 | 第21-23页 |
| 第2章 利用木糖产高纯度L-乳酸大肠杆菌基因工程菌WL201的构建 | 第23-38页 |
| ·引言 | 第23-24页 |
| ·实验材料 | 第24-28页 |
| ·菌种、质粒和引物 | 第24-26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-32页 |
| ·大肠杆菌工程菌SZ470/pKD46的构建 | 第28-29页 |
| ·敲除片段的制备 | 第29页 |
| ·PCR产物在SZ470/pKD46的电转化 | 第29-30页 |
| ·重组菌株WL200的鉴定 | 第30页 |
| ·P.acidilactici ldhL基因扩增 | 第30-31页 |
| ·ldhL基因染色体插入 | 第31页 |
| ·重组菌株WL201的鉴定 | 第31页 |
| ·无氧管培养 | 第31页 |
| ·发酵产物的分析方法 | 第31-32页 |
| ·实验结果 | 第32-37页 |
| ·重组大肠杆菌WL200的构建及鉴定 | 第32-33页 |
| ·ldhL基因的扩增 | 第33-34页 |
| ·重组大肠杆菌WL201的构建及鉴定 | 第34-36页 |
| ·厌氧管培养改良菌株 | 第36-37页 |
| ·小结 | 第37-38页 |
| 第3章 重组大肠杆菌培养条件的优化 | 第38-47页 |
| ·引言 | 第38-39页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·菌株 | 第39页 |
| ·实验试剂 | 第39页 |
| ·实验仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-40页 |
| ·种子培养 | 第39-40页 |
| ·葡萄糖、木糖以及木糖和葡萄糖混合发酵 | 第40页 |
| ·金属Mg~(2+)离子浓度优化 | 第40页 |
| ·发酵罐发酵培养 | 第40页 |
| ·发酵液分析方法 | 第40页 |
| ·实验结果与讨论 | 第40-45页 |
| ·利用不同碳源发酵培养 | 第40-43页 |
| ·Mg~(2+)矿浓度对WL202产L-乳酸的影响及最适浓度的探索 | 第43页 |
| ·7L发酵罐扩大培养 | 第43-45页 |
| ·小结 | 第45-47页 |
| 第4章 乳酸片球菌L-乳酸脱氢酶基因的克隆及在工程菌WL202中的过量表达 | 第47-57页 |
| ·引言 | 第47-48页 |
| ·实验材料 | 第48-50页 |
| ·菌株和质粒 | 第48页 |
| ·实验试剂 | 第48-50页 |
| ·实验仪器 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-52页 |
| ·ldhL基因的PCR扩增 | 第50-51页 |
| ·ldhL与质粒pMD-18-T连接、转化 | 第51页 |
| ·质粒pMD-18T-ldhL的酶切鉴定 | 第51页 |
| ·重组质粒pET-28a-ldhL的构建及鉴定 | 第51-52页 |
| ·ldhL基因在重组大肠杆菌中的诱导表达 | 第52页 |
| ·7L发酵罐发酵 | 第52页 |
| ·实验结果与讨论 | 第52-56页 |
| ·ldhL基因的扩增 | 第52-53页 |
| ·PET-28a-ldhL重组质粒的构建与鉴定 | 第53-54页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第54-55页 |
| ·7L发酵罐发酵 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 第5章 工程菌WL202利用木糖驯化研究 | 第57-66页 |
| ·引言 | 第57页 |
| ·实验材料 | 第57-59页 |
| ·菌株 | 第57页 |
| ·主要试剂 | 第57-59页 |
| ·实验仪器 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-60页 |
| ·种子培养 | 第59页 |
| ·重组大肠杆菌WL202高糖浓度的驯化 | 第59页 |
| ·重组大肠杆菌WL204利用无机盐培养基的驯化 | 第59页 |
| ·菌株的分离和鉴定 | 第59-60页 |
| ·发酵罐发酵培养 | 第60页 |
| ·实验结果与讨论 | 第60-64页 |
| ·小型发酵罐条件下的木糖发酵 | 第60-62页 |
| ·驯化培养基的确定 | 第62页 |
| ·分离的菌株发酵情况比较 | 第62-63页 |
| ·7L发酵罐发酵实验 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64-66页 |
| 第6章 结论与展望 | 第66-69页 |
| ·结论 | 第66-67页 |
| ·展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75页 |
