| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第1章 引言 | 第10-23页 |
| ·概述 | 第10-11页 |
| ·核糖体的结构与功能 | 第11-12页 |
| ·转录调控 | 第12-16页 |
| ·转录因子 | 第13-15页 |
| ·转录起始复合物 | 第15-16页 |
| ·核心启动子 | 第16-17页 |
| ·植物核糖体蛋白保守motifs的国内外研究进展 | 第17-20页 |
| ·通过Β-半乳糖苷酶活性检测核糖体蛋白表达量 | 第20-21页 |
| ·本课题的研究目的、意义 | 第21-22页 |
| ·本课题的特色与创新之处 | 第22-23页 |
| 第2章 材料与方法 | 第23-56页 |
| ·实验材料 | 第23-31页 |
| ·菌种及质粒 | 第23-25页 |
| ·酶及化学试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26-29页 |
| ·用于酵母基因组DNA抽提缓冲液 | 第29-30页 |
| ·酵母RNA抽提及电泳相关缓冲液 | 第30页 |
| ·Northern blot杂交相关缓冲液 | 第30-31页 |
| ·拟南芥核糖蛋白基因RPL36B的克隆 | 第31-33页 |
| ·拟南芥的组织培养 | 第31页 |
| ·植物基因组DNA抽提 | 第31-32页 |
| ·从拟南芥基因组中扩增RPL36B基因 | 第32-33页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收目的基因产物 | 第33页 |
| ·在拟南芥RPL36B启动子上游motifs上引入突变 | 第33-38页 |
| ·拟南芥RPL36B motif1-1上下游片段的合成 | 第34-35页 |
| ·拟南芥RPL36B motif1-1 PCR产物的纯化 | 第35页 |
| ·拟南芥RPL36B motif1-1 PCR产物双酶切 | 第35-36页 |
| ·将拟南芥RPL36B上下游片段克隆到pBluescriptⅡSK(-) | 第36-37页 |
| ·拟南芥RPL36 Bmotif1-1上下游片段克隆的菌落PCR验证 | 第37页 |
| ·拟南芥RPL36B motif1-1点突变在SK(-)上的构建 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备和转化 | 第38-40页 |
| ·大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌DH5a的转化 | 第39页 |
| ·大肠杆菌质粒的抽提 | 第39-40页 |
| ·酵母载体的克隆 | 第40-43页 |
| ·酵母载体上的构建 | 第40页 |
| ·酵母的电转化 | 第40-41页 |
| ·酵母的化学转化 | 第41-43页 |
| ·酵母菌落PCR | 第43页 |
| ·酵母总RNA的抽提(热酚法) | 第43-44页 |
| ·在农杆菌载体pCAMBIA1301上的克隆 | 第44-47页 |
| ·农杆菌GV3101感受态细胞的制备与转化 | 第45页 |
| ·农杆菌质粒的抽提 | 第45-46页 |
| ·农杆菌克隆片段的验证 | 第46-47页 |
| ·农杆菌侵染胡萝卜下胚轴步骤 | 第47页 |
| ·RNA变性电泳 | 第47-48页 |
| ·FA RNA琼脂糖凝胶的配制 | 第47-48页 |
| ·RNA样品的处理 | 第48页 |
| ·RNA电泳条件 | 第48页 |
| ·Northern blot | 第48-50页 |
| ·转膜装置 | 第48-49页 |
| ·随机引物法标记探针(TaKaRa) | 第49页 |
| ·GE microspin columns | 第49-50页 |
| ·Northern blot | 第50页 |
| ·烟草RNA的抽提 | 第50-52页 |
| ·烟草的转基因 | 第50-51页 |
| ·转化体的GUS染色 | 第51页 |
| ·烟草转化体的RNA抽提 | 第51-52页 |
| ·拟南芥RPL36B启动子上游保守序列突变报告载体的构建 | 第52-54页 |
| ·拟南芥启动子序列的克隆 | 第52-53页 |
| ·酵母序列的克隆 | 第53页 |
| ·lacZ序列的克隆 | 第53-54页 |
| ·检测Β-半乳糖苷酶活性 | 第54-56页 |
| 第3章 结果与分析 | 第56-69页 |
| ·拟南芥核糖蛋白基因RPL36B的克隆 | 第56页 |
| ·拟南芥RPL36B启动子上游保守motifs突变载体的构建 | 第56-59页 |
| ·拟南芥RPL36B启动子上游保守motifs的合成(以mutl为例) | 第57-58页 |
| ·拟南芥RPL36B motifs上下游片段大肠杆菌转化及结果验证 | 第58-59页 |
| ·拟南芥RPL36B启动子保守motifs mut1突变的构建 | 第59页 |
| ·拟南芥RPL36B motifs突变在农杆菌载体pCAMBIA1301的克隆 | 第59-60页 |
| ·拟南芥RPL36B motifs的合成 | 第59-60页 |
| ·拟南芥RPL36B motifs突变农杆菌载体pCAMBIA1301的验证 | 第60页 |
| ·拟南芥RPL36Bmotifs突变在酵母YCplac111载体上的克隆 | 第60-61页 |
| ·拟南芥RPL36B motifs的合成 | 第60-61页 |
| ·拟南芥RPL36B motifs在酵母载体YCplac111克隆的验证 | 第61页 |
| ·拟南芥RPL36B motifs突变在酵母YEplac195载体上的克隆 | 第61-62页 |
| ·酵母Northern检测结果 | 第62-64页 |
| ·拟南芥RPL36B酵母报告基因的构建 | 第64-68页 |
| ·LacZ开放阅读框的PCR合成 | 第65-66页 |
| ·酵母片段的PCR合成 | 第66-67页 |
| ·拟南芥含有motifs突变的序列合成 | 第67-68页 |
| ·拟南芥RPL36B保守motifs转化烟草悬浮细胞GUS染色结果 | 第68-69页 |
| 第4章 讨论与展望 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 附录1 | 第76-78页 |
| 附录2 | 第78-79页 |
