| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 图表清单 | 第10-11页 |
| Abbreviations | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-19页 |
| 1 防御素和禽 β-防御素的特征 | 第12-14页 |
| 2 防御素的作用机理及禽 β-防御素的生物学活性 | 第14-16页 |
| 3 防御素的基因工程 | 第16-19页 |
| 引言 | 第19-20页 |
| 1 材料与方法 | 第20-34页 |
| ·实验材料 | 第20-25页 |
| ·菌株、质粒、基因和引物 | 第20-21页 |
| ·实验耗材 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-23页 |
| ·试剂和缓冲液 | 第23-25页 |
| ·主要仪器与设备 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-34页 |
| ·分子生物学操作 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第26页 |
| ·PCR 扩增鸡成熟肽基因片段 AvBD7 | 第26-27页 |
| ·GST 标签融合表达载体 pGEX-6P-1-AvBD7 的构建 | 第27-28页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第28-30页 |
| ·AvBD7 成熟肽的纯化 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测和 MALDI-TOF-MS 分析及鉴定 | 第31-32页 |
| ·表达产物体外抑菌活性的检测 | 第32-33页 |
| ·AvBD7 成熟肽对不同指示菌的最低抑菌浓度(MIC)测定 | 第33-34页 |
| 2 结果和分析 | 第34-46页 |
| ·PCR扩增鸡成熟肽基因片段AvBD7 | 第34页 |
| ·鸡成熟肽基因片段AvBD7 的体外合成 | 第34页 |
| ·鸡成熟肽基因片段AvBD7 的克隆 | 第34页 |
| ·GST标签融合表达载体pGEX-6P-1-AvBD7 的构建 | 第34-36页 |
| ·重组质粒pGEX-6P-1-AvBD7 的菌落PCR鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pGEX-6P-1-AvBD7 的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·序列测定及分析 | 第36页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第36-40页 |
| ·融合蛋白GST-AvBD7 的诱导表达 | 第36-37页 |
| ·融合蛋白诱导时间的摸索 | 第37-38页 |
| ·融合蛋白IPTG诱导浓度的摸索 | 第38-39页 |
| ·融合蛋白诱导温度及最佳诱导条件的确定 | 第39-40页 |
| ·AvBD7 成熟肽的纯化 | 第40-42页 |
| ·亲和层析纯化 | 第40-41页 |
| ·AvBD7 成熟肽的超滤纯化及C18 ZipTip层析柱纯化 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测和MALDI-TOF-MS分析及鉴定 | 第42-43页 |
| ·表达产物体外抑菌活性的检测 | 第43-44页 |
| ·AvBD7 成熟肽对不同指示菌的最低抑菌浓度(MIC)测定 | 第44-46页 |
| 3 讨论 | 第46-51页 |
| ·AvBD7 基因的序列分析 | 第46页 |
| ·宿主菌与表达载体选择 | 第46-47页 |
| ·融合蛋白的可溶性优化表达 | 第47-48页 |
| ·AvBD7 成熟肽的纯化 | 第48-49页 |
| ·AvBD7 成熟肽的活性分析 | 第49-50页 |
| ·本实验的后续研究 | 第50-51页 |
| 4 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录 | 第58-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 个人简介 | 第63页 |
| 在读期间撰写的学术论文 | 第63页 |
