| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-35页 |
| ·微藻生物柴油概况 | 第13-14页 |
| ·生物柴油简介 | 第13页 |
| ·以微藻为原料制备生物柴油具有明显的优势 | 第13-14页 |
| ·微藻的油脂合成与积累概况 | 第14-20页 |
| ·植物油脂的合成与积累 | 第14-16页 |
| ·微藻油脂的合成与积累 | 第16-18页 |
| ·微藻与高等植物脂代谢的比较 | 第18页 |
| ·微藻油脂积累的影响因素 | 第18-20页 |
| ·莱茵衣藻是一种重要的模式生物 | 第20-22页 |
| ·莱茵衣藻细胞结构 | 第20页 |
| ·莱茵衣藻的生活史 | 第20-21页 |
| ·莱茵衣藻是一种重要的模式生物 | 第21-22页 |
| ·莱茵衣藻遗传转化的研究进展 | 第22-25页 |
| ·莱茵衣藻细胞核转化 | 第22-24页 |
| ·莱茵衣藻的细胞器转化 | 第24页 |
| ·筛选标记 | 第24-25页 |
| ·调控元件 | 第25页 |
| ·MicroRNA研究概况 | 第25-30页 |
| ·miRNA简介 | 第25-26页 |
| ·miRNA的发现过程 | 第26-27页 |
| ·microRNA的生物合成 | 第27-28页 |
| ·miRNA的作用机制 | 第28-29页 |
| ·miRNA与环境胁迫 | 第29页 |
| ·人工微RNA(artificial microRNA,amiRNA)技术 | 第29-30页 |
| ·本研究中选择的基因 | 第30-33页 |
| ·酰基载体蛋白简介 | 第30-31页 |
| ·编码ACP的基因家族 | 第31-32页 |
| ·有关ACP1和ACP2对油脂合成的研究 | 第32-33页 |
| ·本文的研究目的和意义 | 第33-35页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第35-52页 |
| ·材料 | 第35-41页 |
| ·菌株和质粒 | 第35-36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·主要试剂和酶 | 第37页 |
| ·主要缓冲液 | 第37-39页 |
| ·仪器和设备 | 第39页 |
| ·本实验中用到的引物 | 第39-41页 |
| ·方法 | 第41-52页 |
| ·质粒DNA的抽提及纯化 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·大肠杆菌的常规转化 | 第42页 |
| ·大肠杆菌的快速转化 | 第42-43页 |
| ·DNA胶回收 | 第43页 |
| ·PCR反应体系 | 第43页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的诱导与表达 | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE检测表达蛋白 | 第44-45页 |
| ·免疫印记检测表达蛋白 | 第45页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第45页 |
| ·莱茵衣藻的培养 | 第45-46页 |
| ·接合转移(MAGIC)构建amiRNA表达载体的过程(图2-1) | 第46-47页 |
| ·莱茵衣藻CC-425的玻璃珠转化 | 第47-48页 |
| ·衣藻总DNA的提取 | 第48页 |
| ·荧光定量PCR检测 | 第48-50页 |
| ·Nile red染色法检测衣藻中中性脂含量 | 第50页 |
| ·普通PCR扩增 | 第50-52页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第52-63页 |
| ·amiRNA表达载体pmiR1162-ACP1和pmiR1162-ACP2的构建 | 第52-55页 |
| ·分别含有靶向ACP1或ACP2基因amiRNA分子的克隆载体pRTK-ACP1和pRTK-ACP2的构建 | 第52-55页 |
| ·转基因衣藻的获得 | 第55-57页 |
| ·amiRNA分子显著下调了靶基因的表达 | 第57-58页 |
| ·ACP1和ACP2基因在大肠杆菌中的表达 | 第58-60页 |
| ·pet23a-ACP1和pet23a-ACP2载体的构建 | 第58-59页 |
| ·酰基载体蛋白在大肠杆菌中的诱导表达及SDS-PAGE、western blotting分析 | 第59-60页 |
| ·蛋白质印迹检测转基因藻酰基载体蛋白(ACP2)水平 | 第60-61页 |
| ·负氮条件下利用Nile red染色法测定中性脂的相对含量 | 第61-63页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第63-65页 |
| ·讨论 | 第63-64页 |
| ·MicroRNA在莱茵衣藻中的干扰效果 | 第63-64页 |
| ·ACP1与ACP2基因下调对莱茵衣藻油脂积累的影响 | 第64页 |
| ·展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
