| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 附图清单 | 第10-11页 |
| 附表清单 | 第11-12页 |
| 主要缩略词和符号表 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-21页 |
| ·真菌杀虫剂的特点和发展前景 | 第13-14页 |
| ·真菌杀虫剂的特点 | 第13页 |
| ·真菌杀虫剂发展前景 | 第13-14页 |
| ·真菌杀虫剂功能基因研究 | 第14页 |
| ·真菌蛋白酶研究进展及分类 | 第14-15页 |
| ·真菌蛋白酶研究进展 | 第14-15页 |
| ·真菌蛋白酶分类 | 第15页 |
| ·真菌蛋白酶在昆虫体壁中的侵染机制 | 第15页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白 | 第15-17页 |
| ·巴斯德毕赤酵母研究进展 | 第15-16页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的优点 | 第16-17页 |
| ·基因染色体步移技术研究进展及应用 | 第17-18页 |
| ·基因染色体步移技术研究进展 | 第17页 |
| ·基因染色体步移技术应用 | 第17页 |
| ·基因染色体获取上游序列的意义 | 第17-18页 |
| ·荧光定量 PCR 作用原理及应用 | 第18-19页 |
| ·定量 PCR 研究进展 | 第18页 |
| ·荧光定量 PCR 作用原理 | 第18页 |
| ·荧光定量 PCR 应用 | 第18-19页 |
| ·虫生真菌基因工程研究进展 | 第19页 |
| ·虫生真菌研究展望 | 第19-21页 |
| 2 引言 | 第21-22页 |
| ·研究目的意义 | 第21页 |
| ·主要研究内容 | 第21-22页 |
| 3 材料和方法 | 第22-45页 |
| ·材料 | 第22-26页 |
| ·菌株来源 | 第22页 |
| ·主要试剂配方 | 第22-24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-45页 |
| ·粉棒束孢菌丝的培养与 DNA 和 RNA 的获取与检测 | 第26-28页 |
| ·粉棒束孢类枯草杆菌蛋白酶结构基因的克隆 | 第28页 |
| ·PCR 产物的回收、克隆及测序 | 第28-30页 |
| ·DNA 步移法扩增粉棒束孢类枯草杆菌蛋白酶 pr1H 基因上游序列 | 第30-32页 |
| ·序列及进化分析 | 第32页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第32-33页 |
| ·粉棒束孢类枯草杆菌蛋白酶 Ifpr1 特异片段的扩增 | 第33页 |
| ·粉棒束孢蛋白酶基因 Ifpr1 cDNA 的 3/5’RACE 扩增 | 第33-37页 |
| ·粉棒束孢蛋白酶基因 Ifpr1 cDNA 全长、结构基因及上游序列克隆 | 第37-38页 |
| ·粉棒束孢蛋白酶基因 pr1 和 Ifpr1 在诱导培养条件下的表达差异 | 第38-39页 |
| ·粉棒束孢蛋白酶基因 Ifpr1 的真核表达载体 pPIC9K/ Ifpr1 的构建 | 第39-45页 |
| 4 结果与分析 | 第45-60页 |
| ·粉棒束孢类枯草杆菌蛋白酶结构基因与上游序列的克隆与分析 | 第45-48页 |
| ·粉棒束孢类枯草杆菌蛋白酶结构基因的克隆与分析 | 第45-46页 |
| ·粉棒束孢类枯草杆菌蛋白酶基因 pr1H 上游序列的克隆与分析 | 第46-48页 |
| ·粉棒束孢 Ifpr1 cDNA 的特异片段扩增 | 第48页 |
| ·粉棒束孢 Ifpr1 基因 cDNA 的 3/5’RACE 扩增 | 第48-49页 |
| ·Ifpr1 基因及其编码的氨基酸的特征分析 | 第49-51页 |
| ·Ifpr1 基因序列分析 | 第49-50页 |
| ·Ifpr1 基因氨基酸序列分析 | 第50-51页 |
| ·粉棒束孢类枯草杆菌蛋白酶基因 Ifpr1 上游序列的克隆与分析 | 第51-52页 |
| ·不同诱导条件下蛋白酶表达分析 | 第52-57页 |
| ·Realtime-PCR 标准曲线的获得 | 第52-55页 |
| ·不同时间段蝉蜕诱导诱导条件下 pr1H 的表达 | 第55页 |
| ·不同时间段蝉蜕诱导诱导条件下 Ifpr1 的表达 | 第55-56页 |
| ·pr1H 与 Ifpr1 诱导前后表达量的比较 | 第56-57页 |
| ·粉棒束孢蛋白酶基因 Ifpr1 酵母表达分析 | 第57-60页 |
| ·粉棒束孢蛋白酶基因真核表达载体 pPIC9K/Ifpr1 的构建 | 第57页 |
| ·含高拷贝 Ifpr1 基因的重组毕赤酵母转化子的 G418 抗性筛选 | 第57-58页 |
| ·重组毕赤酵母工程菌株外源基因蛋白的表达及 SDS-PAGE 检测 | 第58-59页 |
| ·表达产物酶活检测 | 第59-60页 |
| 5 讨论 | 第60-62页 |
| ·粉棒束孢类枯草杆菌蛋白酶 Ifpr1 的研究及蛋白酶研究 | 第60页 |
| ·粉棒束孢类枯草杆菌蛋白酶上游序列的作用及规律 | 第60页 |
| ·粉棒束孢类枯草杆菌蛋白酶在不同培养条件下的表达情况 | 第60-61页 |
| ·粉棒束孢类枯草杆菌蛋白酶 Ifpr1 的真核表达研究 | 第61-62页 |
| 6 结论 | 第62-64页 |
| ·粉棒束孢类枯草杆菌蛋白酶 pr1H 上游序列分析 | 第62页 |
| ·粉棒束孢类枯草杆菌蛋白酶 Ifpr1 特异片段及全长的获取 | 第62页 |
| ·粉棒束孢类枯草杆菌蛋白酶 Ifpr1 上游序列分析 | 第62页 |
| ·粉棒束孢类枯草杆菌蛋白酶 pr1 与 Ifpr1 的定量表达 | 第62-63页 |
| ·粉棒束孢类枯草杆菌蛋白酶 Ifpr1 真核表达结果 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第71页 |
