| 本论文由国家转基因生物新品种培育重大专项资助 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 符号说明 | 第8-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-26页 |
| ·精子介导转基因的研究进展 | 第11-18页 |
| ·SMGT的机理 | 第13-15页 |
| ·SMGT的主要环节及影响因素 | 第15-17页 |
| ·SMGT的改进方法 | 第17-18页 |
| ·SMGT获得转基因动物的繁殖技术 | 第18页 |
| ·卵胞质内单精子注射的研究进展 | 第18-20页 |
| ·SMGT-ICSI的主要环节 | 第20-22页 |
| ·卵母细胞的收集和处理 | 第20页 |
| ·精子的准备 | 第20-21页 |
| ·精子的显微注射 | 第21页 |
| ·ICSI后胚胎的激活 | 第21页 |
| ·ICSI后胚胎的培养 | 第21-22页 |
| ·影响SMGT-ICSI的主要因素 | 第22-24页 |
| ·精子获能与顶体反应 | 第22页 |
| ·精子新鲜与死活 | 第22-23页 |
| ·精子不同发生阶段 | 第23页 |
| ·精子预处理 | 第23-24页 |
| ·ICSI后卵的激活方法 | 第24页 |
| ·本研究的背景、目的和意义 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-38页 |
| ·试验材料 | 第26-29页 |
| ·实验动物 | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26-27页 |
| ·试验试剂 | 第27-29页 |
| ·试验方法 | 第29-38页 |
| ·卵母细胞的收集、体外成熟及卵丘细胞的去除 | 第29-30页 |
| ·纳米化PAMAM-D介导精子转染 | 第30-31页 |
| ·转染精子的原位杂交检测 | 第31-32页 |
| ·纳米化PAMAM-D介导后转染精子的IVF | 第32-33页 |
| ·体外受精胚胎基因组的PCR分析 | 第33页 |
| ·纳米化PAMAM-D介导后转染精子ICSI | 第33页 |
| ·SMGT-ICSI后卵母细胞激活 | 第33-34页 |
| ·SMGT-AI制备植酸酶转基因猪 | 第34-37页 |
| ·数据分析 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-48页 |
| ·纳米化PAMAM-D介导猪精子转染外源DNA的条件的优化 | 第38-40页 |
| ·不同PAMAM-D和外源DNA剂量配伍对猪精子转染外源DNA效率的影响 | 第38页 |
| ·不同孵育温度和时间对猪精子转染外源DNA效率的影响 | 第38-39页 |
| ·比较PAMAM-D和脂质体对猪精子转染外源DNA效率的影响 | 第39页 |
| ·不同DNA剂量、孵育温度和时间对精子活力的影响 | 第39-40页 |
| ·不同载体处理猪精子对EGFP基因在体外受精胚胎中表达的影响 | 第40-41页 |
| ·SMGT-卵胞质内单精子注射技术生产转基因猪 | 第41-45页 |
| ·卵母细胞的体外成熟 | 第41-42页 |
| ·冻融处理精子对SMGT-ICSI胚胎体外发育和EGFP基因表达的影响 | 第42-43页 |
| ·PAMAM-D和脂质体处理冻融精子对SMGT-ICSI胚胎体外发育和EGFP基因表达的影响 | 第43页 |
| ·电激活对SMGT-ICSI胚胎体外发育和EGFP基因表达的影响 | 第43-44页 |
| ·不同化学激活方法对SMGT-ICSI胚胎体外发育和EGFP表达的影响 | 第44页 |
| ·不同时间间隔的激活处理对SMGT-ICSI胚胎体外发育和EGFP表达的影响 | 第44-45页 |
| ·SMGT-人工授精技术生产植酸酶转基因猪 | 第45-48页 |
| 4 讨论 | 第48-53页 |
| ·PAMAM-D介导猪精子转染外源DNA条件的优化 | 第48-49页 |
| ·PAMAM-D和脂质体对猪精子转染外源DNA效率的影响 | 第49-50页 |
| ·激活处理对SMGT-ICSI胚胎体外发育和EGFP基因表达的影响 | 第50-51页 |
| ·SMGT-人工授精技术生产植酸酶转基因猪 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第62页 |
