| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| ·植物R基因介导的免疫系统 | 第10-15页 |
| ·R基因介导的免疫反应机制 | 第11-12页 |
| ·RAR1在R基因介导抗病反应中的作用 | 第12-13页 |
| ·SGT1在R基因介导抗病反应中的作用 | 第13-15页 |
| ·病毒介导的基因沉默 | 第15-19页 |
| ·RNAi的分子机理 | 第15-16页 |
| ·病毒介导的基因沉默的分子机理 | 第16页 |
| ·病毒介导的基因沉默的特点 | 第16页 |
| ·病毒介导的基因沉默技术在植物内源基因功能研究中的应用 | 第16-17页 |
| ·病毒介导的基因沉默的优缺点 | 第17-19页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-38页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·各种酶及试剂 | 第21-22页 |
| ·本实验用到的引物 | 第22页 |
| ·番木瓜RAR1、SGT1编码区全长的克隆 | 第22-24页 |
| ·叶片总RNA的提取 | 第22-23页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第23页 |
| ·PCR扩增RAR1、SGT1编码区全长 | 第23页 |
| ·目的片段AT克隆T-vector | 第23-24页 |
| ·T3-vector(含目的片断)转化大肠杆菌及阳性克隆的筛选 | 第24页 |
| ·番木瓜PDS部分编码区(652bp)的克隆 | 第24-25页 |
| ·PCR引物的设计 | 第24页 |
| ·PCR扩增 | 第24页 |
| ·目的片段AT克隆T-vector | 第24-25页 |
| ·T3-vector(含目的片断)转化大肠杆菌及阳性克隆的筛选 | 第25页 |
| ·拟南芥转番木瓜RAR1、SGT1基因植株的获得 | 第25-31页 |
| ·番木瓜RAR1、SGT1超表达载体的构建 | 第25-28页 |
| ·番木瓜RAR1、SGT1超表达工程农杆菌的构建 | 第28页 |
| ·花序浸染法转化拟南芥 | 第28-29页 |
| ·T1代拟南芥种子的抗性筛选及PCR鉴定 | 第29-31页 |
| ·转基因拟南芥中番木瓜RAR1基因的表达分析 | 第31-32页 |
| ·RT-PCR分析 | 第31页 |
| ·GUS染色分析 | 第31-32页 |
| ·T2代拟南芥苗的抗核盘菌分析 | 第32-33页 |
| ·番木瓜中的病毒介导基因沉默实验 | 第33-38页 |
| ·番木瓜PDS、SGT1沉默载体的构建 | 第34-36页 |
| ·番木瓜PDS、SGT1沉默载体转化农杆菌 | 第36页 |
| ·番木瓜PDS沉默(VIGS)实验 | 第36-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-64页 |
| ·番木瓜RAR1(CpRAR1)编码区的克隆 | 第38-41页 |
| ·克隆片段与预测CpRAR1基因EST序列的比较 | 第38-39页 |
| ·克隆片段编码蛋白保守结构域分析 | 第39页 |
| ·克隆片段与其它物种RAR1序列的对位排列比对分析 | 第39-41页 |
| ·基因结构 | 第41页 |
| ·系统发生分析 | 第41页 |
| ·番木瓜SGT1(CpSGT1)编码区的克隆 | 第41-45页 |
| ·克隆片段编码蛋白保守结构域分析 | 第42-43页 |
| ·克隆片段与其它物种SGT1序列的对位排列比对分析 | 第43-45页 |
| ·系统发生分析 | 第45页 |
| ·拟南芥转番木瓜RAR1、SGT1基因植株的获得 | 第45-53页 |
| ·番木瓜RAR1、SGT1超表达载体的构建 | 第45-52页 |
| ·拟南芥转番木瓜RAR1、SGT1基因植株的获得 | 第52-53页 |
| ·转基因拟南芥中CpRAR1基因的表达分析 | 第53-56页 |
| ·RAR1、RAR1-GUS转基因拟南芥T2代苗的抗核盘菌分析 | 第56-58页 |
| ·番木瓜中的病毒介导基因沉默(VIGS)实验 | 第58-64页 |
| ·番木瓜PDS(CpPDS)部分编码区的克隆 | 第58页 |
| ·番木瓜SGT1沉默片段的PCR克隆 | 第58-59页 |
| ·沉默载体的构建 | 第59-63页 |
| ·番木瓜CpPDS沉默(VIGS)实验 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-69页 |
| ·CpRAR1基因cDNA编码区全长的获得 | 第64页 |
| ·CpSGT1基因cDNA编码区全长的获得 | 第64-65页 |
| ·转基因拟南芥中番木瓜RAR1基因的表达分析 | 第65页 |
| ·RAR1,RAR1-GUS转基因拟南芥T2代苗的抗核盘菌分析 | 第65-67页 |
| ·CpRAR1-GUS转基因拟南芥 | 第67页 |
| ·番木瓜中病毒介导的基因沉默实验 | 第67-68页 |
| ·下一步工作 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 附录1 常用溶液和培养基的配制 | 第73-74页 |
| 附录2 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第74-75页 |
| 附录3 农杆菌感受态细胞制备 | 第75页 |
| 附录4 目的质粒转化农杆菌感受态细胞 | 第75页 |
| 附录5 DNA片段凝胶回收 | 第75-76页 |
| 附录6 大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备及目的质粒转化 | 第76页 |
| 附录7 植物总RNA的提取 | 第76-77页 |
| 附录8 cDNA第一链合成 | 第77页 |
| 附录9 AT克隆 | 第77-78页 |
| 附录10 植物叶片总DNA的微量提取 | 第78页 |
| 附录11 番木瓜幼苗的准备 | 第78页 |
| 附录12 T1代拟南芥种子的抗性筛选 | 第78-79页 |
| 附录13 DNA的乙醇沉淀纯化 | 第79页 |
| 附录14 拟南芥叶片的GUS染色 | 第79页 |
| 附录15 番木瓜(夏威夷)SGT1基因编码区序列 | 第79-80页 |
| 附录16 番木瓜(夏威夷)RAR1基因编码区序列 | 第80页 |
| 附录17 番木瓜(夏威夷)PDS基因部分编码区序列 | 第80-81页 |
| 图版与说明 | 第81-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
