| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-27页 |
| ·草甘膦生产及发展 | 第14页 |
| ·草甘膦性质及作用机理 | 第14-18页 |
| ·草甘膦结构及理化性质 | 第14-15页 |
| ·草甘膦的优缺点 | 第15-17页 |
| ·草甘膦作用机制 | 第17-18页 |
| ·草甘膦抗性来源 | 第18-20页 |
| ·EPSPS研究进展 | 第20-23页 |
| ·EPSP合酶分类 | 第20页 |
| ·EPSP合酶的定位和转运肽 | 第20-21页 |
| ·EPSP合酶的高级结构与活性区 | 第21-22页 |
| ·EPSPS基因研究 | 第22-23页 |
| ·抗草甘膦转基因作物的发展 | 第23-25页 |
| ·本研究目的与意义 | 第25-26页 |
| ·本研究技术路线 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-44页 |
| ·实验材料 | 第27-29页 |
| ·供试菌种与载体 | 第27页 |
| ·供试除草剂 | 第27页 |
| ·供试培养基 | 第27页 |
| ·常用试剂配制方法 | 第27-28页 |
| ·试剂盒、酶及其它试剂耗材 | 第28页 |
| ·引物 | 第28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28-29页 |
| ·菌株TY-JM的分离鉴定及系统发育树研究 | 第29-32页 |
| ·菌株TY-JM的富集、分离与纯化 | 第29页 |
| ·菌株TY-JM的形态学研究 | 第29-30页 |
| ·菌株TY-JM的生理生化特性测定 | 第30页 |
| ·18S rRNA的PCR扩增和序列测定 | 第30-32页 |
| ·系统发育树的构建 | 第32页 |
| ·菌株TY-JM的cDNA文库构建 | 第32-36页 |
| ·TY-JM总RNA的提取 | 第32-33页 |
| ·菌株全长cDNA文库的构建及文库质量鉴定 | 第33-36页 |
| ·菌株TY-JM的EPSPS基因克隆 | 第36-37页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·PCR扩增EPSPS基因片段 | 第36页 |
| ·目的片段回收 | 第36-37页 |
| ·连接载体 | 第37页 |
| ·转化及克隆检测 | 第37页 |
| ·测序 | 第37页 |
| ·生物信息学分析 | 第37页 |
| ·菌株TZ1985的EPSPS基因克隆 | 第37-40页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·菌株TZ1985的AROM基因DNA片段分离 | 第38-39页 |
| ·菌株TZ1985的EPSPS基因片段分离 | 第39-40页 |
| ·EPSPS基因的原核表达研究 | 第40-44页 |
| ·制备带酶切位点的EPSPS基因片段 | 第40-42页 |
| ·制备载体 | 第42页 |
| ·连接重组质粒 | 第42页 |
| ·重组质粒的测序验证 | 第42页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第42-43页 |
| ·重组大肠杆菌草甘膦抗性的鉴定 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-64页 |
| ·抗草甘膦菌株TY-JM的分离鉴定 | 第44-47页 |
| ·菌株的分离 | 第44页 |
| ·菌株的形态学特征 | 第44-45页 |
| ·菌株的生理生化特性 | 第45页 |
| ·18S rRNA序列分析 | 第45-47页 |
| ·基于18S rRNA序列的系统发育树构建 | 第47页 |
| ·菌株TY-JM的cDNA文库构建 | 第47-50页 |
| ·TY-JM总RNA质量分析 | 第47-48页 |
| ·合成ds cDNA的PCR最佳循环数的确定 | 第48-49页 |
| ·cDNA片段化分级分离 | 第49页 |
| ·文库质量鉴定 | 第49-50页 |
| ·菌株TY-JM的EPSPS基因克隆 | 第50-52页 |
| ·菌株TZ1985的AROM基因同源序列的确定 | 第52页 |
| ·TZ1985的AROM基因DNA片段扩增 | 第52-55页 |
| ·菌株TZ1985的EPSPS基因克隆 | 第55-57页 |
| ·EPSPS基因序列分析 | 第57-59页 |
| ·EPSPS基因原核表达研究 | 第59-64页 |
| ·制备带酶切位点的基因片段 | 第59-60页 |
| ·原核表达载体构建 | 第60页 |
| ·转化大肠杆菌及阳性克隆子检测 | 第60-61页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第61-62页 |
| ·重组大肠杆菌草甘膦抗性的鉴定 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-67页 |
| ·抗草甘膦菌株TY-JM的分离鉴定 | 第64页 |
| ·cDNA文库构建及文库质量鉴定 | 第64-65页 |
| ·EPSPS基因的克隆与表达研究 | 第65页 |
| ·EPSPS基因的进一步研究 | 第65-67页 |
| 5 结论 | 第67-68页 |
| ·菌株TY-JM鉴定为假丝酵母菌 | 第67页 |
| ·成功构建了菌株TY-JM的cDNA文库 | 第67页 |
| ·EPSPS基因的克隆与序列分析 | 第67页 |
| ·TY-EPSPS和TZ-EPSPS具有抗草甘膦功能 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第75页 |