| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 1 前言 | 第14-26页 |
| ·IKKβ结构与功能 | 第14-16页 |
| ·IKKβ通路与肿瘤 | 第16-17页 |
| ·mTOR 结构与功能 | 第17-18页 |
| ·mTOR 通路与肿瘤 | 第18-20页 |
| ·IKKβ抑制剂 | 第20-23页 |
| ·mTOR 抑制剂 | 第23-26页 |
| 第一章 IKKβ蛋白激酶抑制剂分子水平筛选模型的建立 | 第26-56页 |
| 第一节 IKKβ蛋白激酶的表达、纯化及鉴定 | 第26-45页 |
| ·前言 | 第26页 |
| ·材料与方法 | 第26-38页 |
| ·实验材料 | 第26-31页 |
| ·质粒 | 第26-27页 |
| ·菌种和细胞 | 第27页 |
| ·试剂和耗材 | 第27-30页 |
| ·实验仪器 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-38页 |
| ·IKKβ蛋白的原核表达、纯化 | 第31-33页 |
| ·原核表达 IKKβ蛋白的活性测定 | 第33-34页 |
| ·IKKβ蛋白的杆状病毒昆虫细胞表达、纯化 | 第34-37页 |
| ·昆虫细胞杆状病毒表达 IKKβ蛋白的活性测定 | 第37-38页 |
| ·实验结果 | 第38-44页 |
| ·IKKβ原核表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·IKKβ重组蛋白的原核表达、纯化与鉴定 | 第39-40页 |
| ·原核表达 IKKβ重组蛋白的活性测定 | 第40页 |
| ·昆虫杆状病毒系统 IKKβ供体质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·昆虫杆状病毒系统 IKKβ穿梭质粒的构建 | 第41-42页 |
| ·IKKβ重组蛋白的昆虫细胞表达、纯化与鉴定 | 第42-43页 |
| ·昆虫杆状病毒系统表达 IKKβ蛋白的活性测定 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第二节 IKKβ蛋白激酶抑制剂分子水平筛选模型的建立 | 第45-56页 |
| ·前言 | 第45-46页 |
| ·材料与方法 | 第46-50页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·试剂和耗材 | 第46页 |
| ·阳性对照化合物和待筛化合物 | 第46页 |
| ·实验仪器 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-50页 |
| ·基于化学发光的丝/苏氨酸蛋白激酶 IKKβ抑制剂分子水平筛选模型的建立 | 第47-50页 |
| ·IKKβ激酶抑制剂分子水平的筛选 | 第50页 |
| ·实验结果 | 第50-54页 |
| ·基于化学发光的丝/苏氨酸蛋白激酶 IKKβ抑制剂分子水平筛选模型的建立 | 第50-54页 |
| ·用于筛选化合物的 IKKβ蛋白激酶浓度、ATP 浓度和底物浓度的确定 | 第50-53页 |
| ·使用阳性化合物对筛选体系的验证 | 第53页 |
| ·IKKβ 激酶抑制剂分子水平的筛选 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 第二章 mTOR 蛋白激酶抑制剂分子水平筛选模型的建立 | 第56-80页 |
| 第一节 mTOR 蛋白激酶的表达、纯化及鉴定 | 第56-70页 |
| ·前言 | 第56-57页 |
| ·材料与方法 | 第57-65页 |
| ·实验材料 | 第57-60页 |
| ·质粒 | 第57页 |
| ·菌种和细胞 | 第57页 |
| ·试剂和耗材 | 第57-60页 |
| ·实验仪器 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-65页 |
| ·mTOR-FKD 蛋白的杆状病毒昆虫细胞表达、纯化 | 第60-64页 |
| ·昆虫细胞杆状病毒表达 mTOR-FKD 蛋白的活性测定 | 第64-65页 |
| ·实验结果 | 第65-70页 |
| ·mTOR-FKD 目的基因的克隆 | 第65-67页 |
| ·mTOR-FKD 穿梭质粒的构建 | 第67-68页 |
| ·重组 mTOR-FKD 蛋白的昆虫细胞表达、纯化与鉴定 | 第68-69页 |
| ·昆虫细胞杆状病毒表达 mTOR-FKD 蛋白的活性测定 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70页 |
| 第二节 mTOR-FKD 激酶抑制剂分子水平筛选模型的建立 | 第70-80页 |
| ·前言 | 第70-71页 |
| ·材料与方法 | 第71-75页 |
| ·实验材料 | 第71-72页 |
| ·试剂和耗材 | 第71-72页 |
| ·阳性对照化合物 | 第72页 |
| ·实验仪器 | 第72页 |
| ·实验方法 | 第72-75页 |
| ·用于筛选化合物的 mTOR-FKD 蛋白激酶浓度、ATP 浓度和底物浓度的确定 | 第72-74页 |
| ·使用阳性化合物对筛选体系的验证 | 第74-75页 |
| ·实验结果 | 第75-78页 |
| ·用于筛选化合物的 mTOR-FKD 蛋白激酶浓度、ATP 浓度和底物浓度的确定 | 第75-78页 |
| ·最适 ATP 浓度的确定 | 第75-76页 |
| ·最适底物多肽浓度的确定 | 第76-77页 |
| ·最适 mTOR-FKD 激酶含量的确定 | 第77-78页 |
| ·使用阳性化合物对筛选体系的验证 | 第78页 |
| ·讨论 | 第78-79页 |
| ·小结 | 第79-80页 |
| 总结 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 个人简历 | 第84-85页 |
| 发表的学术论文 | 第85页 |
