| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一部分 实验研究 | 第14-49页 |
| 第一章 绵羊转FST基因骨骼肌细胞系的建立 | 第14-29页 |
| 1. 材料 | 第15页 |
| ·主要仪器设备 | 第15页 |
| ·实验试剂与耗材 | 第15页 |
| ·实验材料 | 第15页 |
| 2. 方法 | 第15-18页 |
| ·绵羊骨骼肌卫星细胞的分离及培养 | 第15-16页 |
| ·绵羊胎儿成纤维细胞的分离及培养 | 第16页 |
| ·绵羊骨骼肌卫星细胞及绵羊胎儿成纤维细胞的冷冻保存 | 第16页 |
| ·绵羊骨骼肌卫星细胞及绵羊胎儿成纤维细胞的解冻复苏培养 | 第16-17页 |
| ·骨骼肌肉卫星细胞和绵羊成纤维细胞的碱性磷酸酶(AKP)活性检测 | 第17页 |
| ·绵羊骨骼肌卫星细胞诱导成肌 | 第17页 |
| ·绵羊骨骼肌卫星细胞及绵羊胎儿成纤维细胞的转染与筛选 | 第17-18页 |
| ·转基因细胞的鉴定 | 第18页 |
| 3. 结果 | 第18-24页 |
| ·绵羊骨骼肌细胞、绵羊胎儿成纤维细胞及转基因细胞的培养 | 第18-20页 |
| ·肌管诱导及其培养 | 第20页 |
| ·G418最小浓度的测定 | 第20-21页 |
| ·生长曲线 | 第21-22页 |
| ·骨骼肌卫星细胞与绵羊成纤维细胞的细胞周期检测 | 第22-23页 |
| ·流式细胞仪检测转基因细胞的电子体积 | 第23-24页 |
| 4. 讨论 | 第24-26页 |
| 参考文献 | 第26-29页 |
| 第二章 FST基因对绵羊骨骼肌细胞发育相关基因表达的影响 | 第29-48页 |
| 第一节 FST及其相关基因在转基因骨骼肌细胞中转录水平的检测 | 第30-37页 |
| 1 材料 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-33页 |
| ·转基因绵羊骨骼肌卫星细胞及肌管细胞的诱导和培养 | 第30页 |
| ·转基因绵羊骨骼肌卫星细胞及肌管总RNA(Total RNA)的提取 | 第30-31页 |
| ·反转录反应(RT-PCR) | 第31页 |
| ·实时定量PCR | 第31-33页 |
| ·实时荧光定量PCR扩增效率以及扩增和熔解曲线的绘制 | 第33页 |
| 3 结果 | 第33-37页 |
| ·RT-PCR产物特异性检测 | 第33-36页 |
| ·不同基因mRNA在骨骼肌卫星细胞、肌管细胞及绵羊胎儿成纤维细胞中的表达 | 第36-37页 |
| 第二节 FST及其相关基因在转基因绵羊肌源细胞中蛋白水平的检测 | 第37-46页 |
| 1 材料 | 第37-38页 |
| 2 方法 | 第38-42页 |
| ·溶液配制 | 第38-40页 |
| ·细胞裂解 | 第40页 |
| ·测定蛋白浓度(Lowry法) | 第40-41页 |
| ·制电泳用蛋白样品 | 第41页 |
| ·电泳 | 第41页 |
| ·转膜 | 第41页 |
| ·免疫印迹 | 第41页 |
| ·ECL检测 | 第41页 |
| ·爆光、显带 | 第41-42页 |
| 3. 结果 | 第42-43页 |
| 4. 讨论 | 第43-46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 第二部分 文献综述 | 第49-65页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读硕士学位期间已发表的学术论文 | 第66页 |
