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黄曲条跳甲关键功能基因的克隆及利用RNAi技术控制害虫

摘要第1-11页
Abstract第11-15页
前言第15-17页
第一章 文献综述第17-43页
 1 黄曲条跳甲及其生活史第17-19页
   ·黄曲条跳甲及其生活史第17-18页
   ·黄曲条跳甲的防治第18-19页
 2 精氨酸激酶及其基因第19-22页
   ·精氨酸激酶第19-21页
   ·精氨酸激酶基因第21-22页
 3 昆虫触角的化学感受蛋白第22-27页
   ·气味结合蛋白第22-24页
   ·气味受体第24-26页
   ·气味降解酶第26-27页
 4 本项目使用的研究技术第27-35页
   ·RNA干扰技术及其进展第27-30页
     ·RNA干涉(RNA Interference,RNAi)第27-28页
     ·RNA干涉研究进展第28-30页
   ·cDNA末端快速扩增技术研究进展第30-35页
     ·RACE技术的原理第31-32页
     ·RACE技术存在的问题与改良第32-35页
       ·反转录反应第33页
       ·加尾反应第33-35页
 参考文献第35-43页
第二章 黄曲条跳甲精氨酸激酶基因的克隆与序列分析第43-63页
 1 材料、试剂与仪器第43-44页
   ·材料第43页
   ·菌种第43页
   ·试剂第43-44页
   ·主要仪器第44页
 2 试验方法第44-51页
   ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法)第44-45页
   ·连接反应产物转化大肠杆菌感受态细胞第45页
   ·PCR鉴定目的基因及测序第45页
   ·黄曲条跳甲mRNA的提取第45-47页
     ·总RNA提取步骤第45-46页
     ·mRNA的获取第46-47页
   ·5′-RACE获得目的基因的5′-端第47-49页
     ·引物设计与合成第47页
     ·5′-RACE-Ready cDNA的合成第47-48页
     ·5′-RACE的PCR第48-49页
   ·3′-RACE获得目的基因的3′-端第49-50页
     ·引物设计与合成第49页
     ·3′-RACE-Ready cDNA的合成第49页
     ·3′-RACE的PCR第49-50页
   ·PsAK氨基酸序列比对及进化树的构建第50页
   ·PsAK三维结构的构建与模拟第50-51页
   ·常用的生物信息分析的相关软件及网站第51页
 3 结果与分析第51-59页
   ·PsAK基因全长cDNA的克隆与序列分析第51-52页
   ·PsAK基因氨基酸序列比较与分析第52-59页
 4 讨论第59-60页
 参考文献第60-63页
第三章 RNA干扰PsAK基因防治黄曲条跳甲第63-81页
 1 材料、试剂与仪器第64-65页
   ·材料第64页
   ·菌种第64页
   ·试剂第64-65页
   ·主要仪器第65页
 2 试验方法第65-70页
   ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法)第65页
   ·连接反应产物转化大肠杆菌感受态细胞第65页
   ·PCR鉴定目的基因及测序第65-66页
   ·dsRNA的构建第66-68页
   ·RNAi与生物分析第68页
   ·RT-PCR分析第68-70页
   ·精氨酸激酶酶活分析第70页
 3 结果与分析第70-76页
   ·dsRNA的构建第70页
   ·RNAi喂饲实验分析第70-73页
   ·RT-PCR与精氨酸激酶酶活性分析第73-76页
 4 讨论第76-77页
 参考文献第77-81页
第四章 黄曲条跳甲嗅觉受体基因的克隆及组织特异性表达第81-100页
 1 材料、试剂与仪器第82-83页
   ·材料第82页
   ·菌种第82页
   ·试剂第82-83页
   ·主要仪器第83页
 2 试验方法第83-88页
   ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法)第83页
   ·连接反应产物转化大肠杆菌感受态细胞第83页
   ·PCR鉴定目的基因及测序第83页
   ·黄曲条跳甲触角mRNA的提取第83-84页
     ·材料的获取第83页
     ·总RNA提取步骤第83页
     ·mRNA的获取第83-84页
   ·RT-PCR获得目的基因的保守区域第84-85页
     ·第一链cDNA的合成第84页
     ·目的基因保守区域的RT-PCR第84-85页
   ·3′-RACE获得目的基因的5′-端第85-86页
     ·引物设计与合成第85页
     ·3′-RACE-Ready cDNA的合成第85页
     ·3′-RACE的PCR第85-86页
   ·5′-RACE获得目的基因的5′-端第86-87页
     ·引物设计与合成第86页
     ·5′-RACE-Ready cDNA的合成第86页
     ·5′-RACE的PCR第86-87页
   ·基因表达谱的半定量RT-PCR分析第87页
   ·PsOrl氨基酸序列比对及进化树的构建第87-88页
   ·常用的生物信息分析的相关软件及网站第88页
 3 结果与分析第88-96页
   ·PsOrl基因全长cDNA的克隆与序列分析第88-90页
   ·结构预测与模拟第90-91页
   ·PsOrl基因氨基酸序列比较与分析第91-94页
   ·比对与进化关系第94-95页
   ·基因表达谱第95-96页
 4 讨论第96-97页
 参考文献第97-100页
第五章 RNAi沉默嗅觉受体损害黄曲条跳甲气味识别能力及对寄主植物的选择性行为第100-117页
 1 材料、试剂与仪器第100-102页
   ·材料第101页
   ·菌种第101页
   ·试剂第101页
   ·主要仪器第101-102页
 2 试验方法第102-105页
   ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法)第102页
   ·连接反应产物转化大肠杆菌感受态细胞第102页
   ·PCR鉴定目的基因及测序第102页
   ·dsRNA的构建第102-103页
   ·微显微注射跳甲的蛹第103-104页
   ·化学趋向行为反应实验第104页
   ·跳甲成虫对寄主植物的选择性行为第104页
   ·RT-PCR分析第104-105页
 3 结果与分析第105-113页
   ·dsRNA的构建第105-106页
   ·化学趋向行为反应第106-109页
   ·Psorl转录沉默效应的RT-PCR第109-110页
   ·黄曲条跳甲成虫对寄主植物的选择性行为第110-113页
 4 讨论第113-114页
 参考文献第114-117页
致谢第117页

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