| 摘要 | 第1-6页 |
| Summary | 第6-12页 |
| 缩略词表 | 第12-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-45页 |
| ·MT命名与分类 | 第15-20页 |
| ·MT超家族的定义和分类 | 第16-17页 |
| ·MT分类描述 | 第17-20页 |
| ·哺乳动物MT的分类 | 第20页 |
| ·金属硫蛋白结构 | 第20-23页 |
| ·MTs一级结构特点 | 第20-21页 |
| ·MTs的高级结构 | 第21-23页 |
| ·哺乳动物MTs的生物学特性 | 第23页 |
| ·金属硫蛋白功能 | 第23-36页 |
| ·重金属解毒 | 第23-25页 |
| ·清除自由基与抗氧化应激 | 第25页 |
| ·MTs抗衰老与神经退行性疾病的作用 | 第25-27页 |
| ·MT-Ⅲ对中枢神经损伤的保护 | 第27-28页 |
| ·内源性MT-Ⅰ和MT-Ⅱ对CNS的作用 | 第28-31页 |
| ·外源性MT-Ⅰ和MT-Ⅱ的作用 | 第31-32页 |
| ·MT-Ⅰ和MT-Ⅱ作用的分子机理 | 第32-35页 |
| ·MT-Ⅲ对CNS的保护作用 | 第35-36页 |
| ·金属硫蛋白基因的分子生物学特性 | 第36-40页 |
| ·哺乳动物MTs基因的结构 | 第36-37页 |
| ·哺乳动物基因的表达调控 | 第37-40页 |
| ·哺乳动物MTs在中枢神经系统中的分布 | 第40-42页 |
| ·MT-Ⅰ和MT-Ⅱ在大脑中的表达 | 第40-41页 |
| ·细胞内MT-Ⅰ和MT-Ⅱ的分布 | 第41页 |
| ·MT-Ⅲ的分布 | 第41-42页 |
| ·金属硫蛋白及其基因应用 | 第42-45页 |
| ·MT启动子转基因的应用 | 第42-43页 |
| ·MT结构基因的应用 | 第43-45页 |
| 2 立题依据 | 第45-47页 |
| 3 材料与方法 | 第47-62页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·动物组织样品 | 第47页 |
| ·主要试剂及来源 | 第47页 |
| ·质粒和菌珠 | 第47页 |
| ·试验用溶液配制 | 第47-48页 |
| ·仪器设备 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-57页 |
| ·引物设计 | 第48-49页 |
| ·组织总RNA提取 | 第49-50页 |
| ·MT-Ⅲ/-Ⅳ RT-PCR反应 | 第50-51页 |
| ·肌肉组织DNA提取方法 | 第51页 |
| ·MT-Ⅲ基因转录区PCR | 第51-52页 |
| ·MT-Ⅳ基因内含子PCR | 第52页 |
| ·5'RACE反应 | 第52-56页 |
| ·PCR产物纯化和凝胶回收方法 | 第56页 |
| ·基因克隆方法 | 第56-57页 |
| ·MT-Ⅲ基因表达方法 | 第57-61页 |
| ·表达基因的制备 | 第57-58页 |
| ·表达载体的制备 | 第58-61页 |
| ·生物信息学分析方法 | 第61-62页 |
| ·核苷酸序列和氨基酸序列相似性分析 | 第61页 |
| ·多序列比对 | 第61页 |
| ·核苷酸序列基本特征分析 | 第61页 |
| ·氨基酸序列基本特征分析 | 第61页 |
| ·信号肽分析 | 第61页 |
| ·蛋白质结构分析 | 第61页 |
| ·核苷酸序列和氨基酸序列进化分析 | 第61页 |
| ·外显子预测 | 第61-62页 |
| 4 结果与分析 | 第62-90页 |
| ·组织RNA提取 | 第62页 |
| ·组织基因组DNA提取结果 | 第62页 |
| ·MT-Ⅲ基因克隆与生物信息学分析 | 第62-75页 |
| ·RT-PCR | 第62页 |
| ·PCR产物克隆及测序 | 第62-63页 |
| ·测序结果及核苷酸特征 | 第63-64页 |
| ·MT-Ⅲ CDS序列同源性分析 | 第64页 |
| ·MT-Ⅲ基因内含子克隆与序列测定 | 第64-65页 |
| ·MT-Ⅲ5'和3'RACE结果 | 第65-69页 |
| ·MT-Ⅲ氨酸基序列同源性及分子进化分析 | 第69-70页 |
| ·MT-Ⅲ蛋白质特征 | 第70-75页 |
| ·MT-Ⅳ CDS克隆与生物信息学分析 | 第75-86页 |
| ·RT-PCR | 第75-76页 |
| ·不同组织器官MT-Ⅳ基因克隆 | 第76页 |
| ·MT-Ⅳ内含子的扩增 | 第76-79页 |
| ·MT—Ⅳ基因编码区基本特征 | 第79页 |
| ·MT—Ⅳ基因编码区同源性分析 | 第79页 |
| ·牦牛MT-Ⅳ氨基酸序列同源性及分子进化分析 | 第79-80页 |
| ·牦牛MT-Ⅰ、MT-Ⅱ、MT-Ⅲ和MT-Ⅳ氨基酸序列比较 | 第80-81页 |
| ·牦牛MT-Ⅳ蛋白质特征 | 第81-86页 |
| ·MT-Ⅲ原核表达 | 第86-90页 |
| ·RT-PCR产物电泳结果 | 第86-87页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第87页 |
| ·表达载体PET-42a(+)的制备与构建 | 第87-88页 |
| ·PET-42a-MT-Ⅲ质粒转化及诱导表达结果 | 第88-90页 |
| 5 讨论 | 第90-97页 |
| ·样品采集对RNA提取的影响 | 第90-91页 |
| ·牦牛MT-Ⅲ和MT-Ⅳ基因核苷酸序列 | 第91页 |
| ·牦牛MT-Ⅲ和MT-Ⅳ生物信息学分析 | 第91-92页 |
| ·MT-Ⅲ和MT-Ⅳ氨基酸序列的系统进化 | 第92页 |
| ·牦牛MT-Ⅲ基因突变位点分析 | 第92-93页 |
| ·牦牛MTs序列间的比较 | 第93页 |
| ·牦牛MT-Ⅳ分布 | 第93-94页 |
| ·牦牛MT-Ⅲ表达载体的选择 | 第94-95页 |
| ·表达宿主菌的选择 | 第95-97页 |
| 6 结论 | 第97-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-115页 |
| 附录 | 第115-118页 |
| 作者简介 | 第118-120页 |
| 导师简介 | 第120-123页 |