| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-31页 |
| ·动物防御素 | 第12-22页 |
| ·防御素的来源与分布 | 第12-13页 |
| ·防御素的染色体定位 | 第13-14页 |
| ·防御素的分子结构特征 | 第14-15页 |
| ·防御素的进化关系 | 第15页 |
| ·防御素的表达调控 | 第15-16页 |
| ·防御素的生理功能及作用机制 | 第16-20页 |
| ·防御素的应用前景 | 第20-22页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 | 第22-30页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统简介 | 第22-23页 |
| ·融合蛋白的表达 | 第23-26页 |
| ·常用的转化方法 | 第26页 |
| ·影响外源蛋白表达的因素 | 第26-27页 |
| ·分泌蛋白的转录后调控 | 第27-28页 |
| ·提高外源基因表达产物的质量 | 第28页 |
| ·应用 | 第28-30页 |
| ·本研究的意义 | 第30-31页 |
| 第二章 牛防御素BNBD5基因的克隆 | 第31-41页 |
| ·实验材料 | 第31-34页 |
| ·实验动物的来源及采集方法 | 第31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31-32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·试剂配制 | 第32-34页 |
| ·试验方法 | 第34-39页 |
| ·牛血液白细胞总RNA的提取 | 第34页 |
| ·总RNA的纯化 | 第34-35页 |
| ·反转录 | 第35页 |
| ·cDNA第一链的检测 | 第35-36页 |
| ·BNBD5基因的PCR扩增及扩增产物的琼脂糖电泳 | 第36页 |
| ·BNBD5基因扩增产物的回收 | 第36-37页 |
| ·BNBD5/pMD19-T克隆质粒的构建 | 第37页 |
| ·BNBD5/pMD19-T质粒的制备 | 第37-38页 |
| ·BNBD5/pMD19-T的检测 | 第38-39页 |
| ·实验结果 | 第39-41页 |
| ·牛血液白细胞总RNA | 第39页 |
| ·反转录检测 | 第39页 |
| ·BNBD5扩增产物 | 第39页 |
| ·BNBD5/pMD19-T质粒提取图 | 第39-40页 |
| ·BNBD5/pMD19-T质粒测序结果 | 第40-41页 |
| 第三章 牛防御素BNBD5的毕赤酵母表达系统的建立 | 第41-55页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41-43页 |
| ·限制性内切酶 | 第41页 |
| ·毕赤酵母表达系统所用溶液 | 第41-43页 |
| ·实验方法 | 第43-50页 |
| ·BNBD5基因片段的亚克隆 | 第43-44页 |
| ·重组毕赤酵母表达载体pPICZαA/BNBD5的构建 | 第44-46页 |
| ·表达载体pPICZαA/BNBD5的鉴定 | 第46页 |
| ·BNBD5基因在毕赤酵母系统中的表达 | 第46-49页 |
| ·BNBD5蛋白的Tricine-SDS-PAGE分析 | 第49-50页 |
| ·实验结果 | 第50-55页 |
| ·牛防御素BNBD5的毕赤酵母表达载体的构建 | 第50-52页 |
| ·重组质粒pPICZαA/BNBD5的序列测定 | 第52页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第52页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第52页 |
| ·重组酵母菌基因组DNA的提取 | 第52-53页 |
| ·重组酵母菌株阳性转化子的筛选 | 第53页 |
| ·重组酵母菌株诱导表达生长曲线 | 第53页 |
| ·Tricine SDS-PAGE分析 | 第53-55页 |
| 第四章 讨论 | 第55-58页 |
| ·研究牛防御素BNBD5的意义 | 第55页 |
| ·毕赤酵母表达 | 第55-56页 |
| ·毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA的选择 | 第55-56页 |
| ·重组酵母表达质粒的转化方法 | 第56页 |
| ·重组酵母表达菌株的选择 | 第56页 |
| ·毕赤酵母表达BNBD5蛋白 | 第56页 |
| ·Tricine SDS-PAGE电泳 | 第56-58页 |
| ·Tricine SDS-PAGE电泳方法 | 第56-57页 |
| ·超低分子量蛋白电泳结果影响因素 | 第57-58页 |
| 第五章 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 附录 | 第64-68页 |
| 附录1 pPICZαA,B,C载体示意图 | 第64-65页 |
| 附录2 牛防御素BNBD5蛋白 | 第65-66页 |
| 附录3 牛β-防御素蛋白家族比对结果 | 第66页 |
| 附录4 测序结果峰图 | 第66-68页 |
| ·BNBD5编码区测序结果峰图 | 第66页 |
| ·重组质粒测序结果峰图 | 第66-67页 |
| ·BNBD5测序结果峰图 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简历 | 第69页 |
