| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-15页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第15-17页 |
| 第1章 文献综述 | 第17-54页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征 | 第17页 |
| ·PRRS的危害及流行病学特点 | 第17-19页 |
| ·PRRSV病原特性 | 第19-24页 |
| ·PRRSV的分类 | 第19页 |
| ·PRRSV的理化学特性 | 第19页 |
| ·PRRSV的抗原性 | 第19-20页 |
| ·PRRSV的细胞增殖特性 | 第20-21页 |
| ·PRRSV的致病机理及生物学特性 | 第21-24页 |
| ·PRRSV分子生物学研究进展 | 第24-39页 |
| ·PRRSV基因组的结构与功能 | 第24-27页 |
| ·PRRSV的蛋白质 | 第27-34页 |
| ·PRRSV的基因组变异和RNA重组 | 第34-36页 |
| ·PRRSV的抗原性变异 | 第36-37页 |
| ·PRRSV的毒力变异 | 第37-38页 |
| ·PRRSV的准种 | 第38-39页 |
| ·PRRSV的免疫学反应 | 第39-45页 |
| ·抗PRRSV的体液免疫反应 | 第39-42页 |
| ·抗PRRSV的细胞免疫反应 | 第42-43页 |
| ·PRRSV与免疫抑制 | 第43-45页 |
| ·PRRS疫苗研究进展 | 第45-54页 |
| ·PRRS传统常规疫苗 | 第45-47页 |
| ·PRRS新型疫苗研究进展 | 第47-54页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第54-55页 |
| 第3章 材料与方法 | 第55-80页 |
| ·试验材料 | 第55-64页 |
| ·毒株、细胞与菌株 | 第55页 |
| ·载体与质粒 | 第55-58页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第58-59页 |
| ·培养基与抗生素及其配制 | 第59-60页 |
| ·免疫反应试验所用抗原及血清 | 第60页 |
| ·主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第60-64页 |
| ·实验动物 | 第64页 |
| ·试验方法 | 第64-80页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第64页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第64页 |
| ·线性质粒DNA末端去磷酸化 | 第64页 |
| ·质粒DNA片段的3′凹端补平 | 第64-65页 |
| ·PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第65页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第65-66页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第66页 |
| ·连接产物的转化 | 第66页 |
| ·质粒的制备与鉴定 | 第66-68页 |
| ·伪狂犬病毒(PRV)基因组DNA的提取 | 第68-69页 |
| ·脂质体共转染法 | 第69-70页 |
| ·重组病毒的蚀斑纯化 | 第70页 |
| ·PCR检测目的外源基因在重组病毒中的整合 | 第70-71页 |
| ·Southern blot印迹分析 | 第71-72页 |
| ·质粒转染(脂质体介导转染法) | 第72页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA)检测目的蛋白的体外表达 | 第72-73页 |
| ·Western blot检测目的蛋白在真核细胞中的表达 | 第73-74页 |
| ·GP5-ELISA试验 | 第74-75页 |
| ·半数细胞培养物感染量(TCID50)的测定 | 第75页 |
| ·微量中和试验(固定病毒-稀释血清法) | 第75页 |
| ·细胞免疫的检测 | 第75-76页 |
| ·样品总RNA的提取 | 第76-77页 |
| ·PRRSV的RT-PCR检测 | 第77-78页 |
| ·PRRSV的巢式RT-PCR(nested RT-PCR,RT-nPCR)检测 | 第78页 |
| ·动物试验 | 第78-79页 |
| ·支气管肺泡灌洗和肺泡巨噬细胞的获取 | 第79页 |
| ·PRRSV病毒粒子的粗提制备 | 第79页 |
| ·统计学方法 | 第79-80页 |
| 第4章 结果与分析 | 第80-124页 |
| ·ORF5m基因的构建及其免疫原性的研究 | 第80-85页 |
| ·表达PRRSV修饰型ORF5基因(ORF5m)的构建 | 第80-82页 |
| ·Western blot检测ORF5m基因体外表达活性 | 第82-83页 |
| ·间接免疫荧光(IFA)检测ORF5m基因的表达 | 第83页 |
| ·免疫小鼠的ELISA抗体水平 | 第83-84页 |
| ·免疫小鼠的中和抗体水平检测 | 第84页 |
| ·pCI-ORF5与pCI-ORF5m免疫小鼠诱导的T细胞增殖反应比较 | 第84-85页 |
| ·ORF5和ORF6双基因共表达诱发免疫应答的研究 | 第85-97页 |
| ·ORF5和ORF6双基因共表达重组真核表达质粒的构建 | 第85-87页 |
| ·GP5和M蛋白共表达形成异源二聚体的鉴定 | 第87-88页 |
| ·GP5和M蛋白共表达的亚细胞定位研究 | 第88-92页 |
| ·免疫小鼠中和抗体的检测 | 第92-94页 |
| ·免疫小鼠淋巴细胞增殖检测 | 第94页 |
| ·免疫小鼠抗GP5蛋白ELISA抗体的检测 | 第94-95页 |
| ·GP5和M蛋白共表达诱发免疫仔猪中和抗体的检测 | 第95-96页 |
| ·GP5和M蛋白共表达诱发免疫仔猪细胞免疫的检测 | 第96-97页 |
| ·PRRSV新型DNA疫苗的构建和免疫效果研究 | 第97-103页 |
| ·ORF5m和ORF6双基因共表达DNA疫苗pCI-ORF5m/ORF6的构建 | 第97-98页 |
| ·"自杀性"DNA疫苗的构建 | 第98-100页 |
| ·ORF5m和ORF6双基因体外共表达检测 | 第100-101页 |
| ·DNA疫苗诱发中和抗体水平检测 | 第101-102页 |
| ·DNA疫苗诱发细胞免疫水平检测 | 第102-103页 |
| ·PRRSV新型PRV载体疫苗的构建和免疫效果研究 | 第103-114页 |
| ·转移质粒的构建 | 第103-106页 |
| ·重组病毒的构建与纯化 | 第106-108页 |
| ·重组病毒的Southern杂交鉴定 | 第108-109页 |
| ·重组病毒的Western blot鉴定 | 第109-110页 |
| ·外源基因的插入对重组病毒在细胞上增殖的影响 | 第110-111页 |
| ·重组病毒免疫小鼠抗PRV特异性抗体的检测 | 第111页 |
| ·重组病毒免疫小鼠抗PRV保护性试验 | 第111-112页 |
| ·免疫小鼠特异性针对PRRSV的中和抗体 | 第112-113页 |
| ·免疫小鼠特异性针对PRRSV的淋巴细胞增殖反应 | 第113-114页 |
| ·pSFV-ORF5m/ORF6和rPRV-GP5m-M在猪体的免疫保护研究 | 第114-124页 |
| ·免疫仔猪诱发抗PRV特异性抗体水平的检测 | 第115页 |
| ·免疫仔猪诱发抗PRRSV特异性抗体水平的检测 | 第115-116页 |
| ·免疫仔猪诱发抗PRRSV特异性淋巴细胞增殖 | 第116-117页 |
| ·攻毒后的临床症状和体温变化 | 第117-118页 |
| ·攻毒后免疫仔猪的体重变化 | 第118页 |
| ·病毒血症和排毒 | 第118-120页 |
| ·组织中病毒的分布 | 第120-121页 |
| ·组织病理变化 | 第121-124页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第124-133页 |
| ·讨论 | 第124-131页 |
| ·GP5和M蛋白异源二聚体的形成 | 第124-125页 |
| ·GP5和M蛋白的亚细胞定位 | 第125页 |
| ·共表达GP5和M蛋白对免疫反应的影响 | 第125-126页 |
| ·ORF5基因的修饰及其诱发的免疫应答 | 第126-127页 |
| ·PRRSV新型DNA疫苗诱发的免疫反应 | 第127-128页 |
| ·PRRS活病毒载体疫苗载体毒株的选择 | 第128页 |
| ·外源基因在重组病毒中的表达 | 第128-129页 |
| ·rPRV-PRRSV最佳候选疫苗株的确定 | 第129页 |
| ·rPRV-GP5m-M和pSFV-ORF5m/ORF6的免疫保护 | 第129-130页 |
| ·PRRSV感染与免疫的相互作用探讨及新型疫苗发展的再思考 | 第130-131页 |
| ·结论 | 第131-133页 |
| 参考文献 | 第133-149页 |
| 致谢 | 第149-150页 |
| 附录 | 第150-152页 |
