| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第12-13页 |
| 第1章 胸膜肺炎放线杆菌Apx Ⅰ与宿主细胞相互作用蛋白的筛选和鉴定 | 第13-52页 |
| 1 文献综述 | 第13-29页 |
| ·细菌的RTX毒素 | 第13-15页 |
| ·RTX毒素结构特征 | 第13页 |
| ·RTX毒素与宿主细胞的相互作用 | 第13-14页 |
| ·RTX毒素诱导细胞死亡的机制 | 第14-15页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的Apx毒素 | 第15-18页 |
| ·Apx Ⅰ | 第15-16页 |
| ·Apx Ⅱ | 第16页 |
| ·ApxⅢ | 第16-17页 |
| ·ApxⅣ | 第17-18页 |
| ·蛋白质与蛋白质相互作用 | 第18-29页 |
| ·研究蛋白质相互作用的意义 | 第18页 |
| ·研究方法 | 第18-29页 |
| ·蛋白质亲和层析 | 第18-19页 |
| ·基于GST融合蛋白的Far-Western和Pull-down技术 | 第19-20页 |
| ·免疫共沉淀法 | 第20-21页 |
| ·串联亲和纯化技术 | 第21-22页 |
| ·酵母双杂交系统 | 第22-23页 |
| ·细菌双杂交筛选系统 | 第23页 |
| ·哺乳动物细胞双杂交系统 | 第23-24页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第24-25页 |
| ·核糖体展示技术 | 第25-26页 |
| ·化学交联技术 | 第26页 |
| ·荧光共振能量转移 | 第26-27页 |
| ·表面等离子体共振 | 第27页 |
| ·蛋白质芯片 | 第27-28页 |
| ·生物信息学 | 第28-29页 |
| 2 研究的目的和意义 | 第29页 |
| 3 材料与方法 | 第29-40页 |
| ·实验材料 | 第29-32页 |
| ·细菌菌种 | 第29页 |
| ·实验动物和细胞 | 第29-30页 |
| ·细菌培养基及其配制 | 第30页 |
| ·主要溶液的配制 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液 | 第30页 |
| ·Western-blot相关溶液 | 第30页 |
| ·噬菌体展示相关溶液 | 第30-31页 |
| ·其他溶液的配制 | 第31页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-40页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌Apx Ⅰ单克隆抗体的生产 | 第32页 |
| ·杂交瘤细胞的复苏 | 第32页 |
| ·腹水的制备 | 第32页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌Apx Ⅰ单克隆抗体的纯化 | 第32-33页 |
| ·缓冲液的准备 | 第32页 |
| ·样品的准备 | 第32页 |
| ·纯化步骤 | 第32页 |
| ·IgG的SDS-PAGE电泳检测 | 第32-33页 |
| ·天然毒素Apx Ⅰ的提取 | 第33-34页 |
| ·天然毒素Apx Ⅰ纯化 | 第34页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第34页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌Apx Ⅰ的Western blot鉴定 | 第34-35页 |
| ·以胸膜肺炎放线杆菌天然Apx Ⅰ为靶蛋白,利用噬菌体展示技术筛选与其相互作用的多肽 | 第35-40页 |
| ·噬菌体滴度的测定 | 第35页 |
| ·淘选程序(固定靶蛋白法) | 第35-37页 |
| ·噬菌体的扩增 | 第37页 |
| ·用ELISA检测所选多肽对靶蛋白的结合 | 第37-38页 |
| ·测序模板的快速纯化 | 第38-39页 |
| ·阳性噬菌体克隆测序及序列分析 | 第39-40页 |
| ·免疫共沉淀鉴定 | 第40页 |
| 4 实验结果与分析 | 第40-48页 |
| ·获得较纯的抗Apx Ⅰ单克隆抗体 | 第40-41页 |
| ·获得较纯的天然毒素Apx Ⅰ | 第41页 |
| ·经Western blot鉴定,天然的Apx Ⅰ有较好的活性 | 第41-42页 |
| ·噬菌体展示技术筛选与天然毒素(Apx Ⅰ)的多肽 | 第42-47页 |
| ·每次淘选前测得噬菌体滴度值 | 第42页 |
| ·ELISA检测所选多肽对靶分子的结合和630nm处的吸光值测定 | 第42-43页 |
| ·提取了10个阳性噬菌体克隆的基因组DNA | 第43-44页 |
| ·10个噬菌体克隆展示多肽的序列分析和网上比对结果 | 第44-47页 |
| ·免疫共沉淀鉴定COX-Ⅰ与Apx Ⅰ互作 | 第47-48页 |
| 5 讨论 | 第48-52页 |
| 第2章 检测猪瘟病毒,猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和 | 第52-65页 |
| 1 文献综述 | 第52-54页 |
| ·猪繁殖障碍疾病临床特点 | 第52-53页 |
| ·常见的几种猪繁殖障碍疾病 | 第53页 |
| ·猪繁殖障碍疾病中的混合感染 | 第53-54页 |
| 2 研究的目的和意义 | 第54-55页 |
| 3 材料和方法 | 第55-58页 |
| ·实验材料 | 第55-56页 |
| ·参考毒株和细胞 | 第55页 |
| ·待检的组织或病料 | 第55页 |
| ·主要试剂和溶液 | 第55-56页 |
| ·引物设计与合成 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-58页 |
| ·病毒的培养 | 第56页 |
| ·病毒RNA的提取和cDNA的合成 | 第56-57页 |
| ·病毒DNA的提取 | 第57页 |
| ·单基因RT-PCR检测方法的建立 | 第57页 |
| ·多重RT-PCR检测方法的建立 | 第57页 |
| ·多重RT-PCR扩增条件的优化 | 第57-58页 |
| ·特异性试验 | 第58页 |
| ·敏感性试验 | 第58页 |
| ·重复性试验 | 第58页 |
| ·临床样品的多重RT-PCR检测 | 第58页 |
| ·临床样品的多重RT-PCR产物的测序 | 第58页 |
| 4 结果与分析 | 第58-64页 |
| ·单基因RT-PCR | 第58-59页 |
| ·多重RT-PCR各种反应条件的优化 | 第59-61页 |
| ·特异性试验 | 第61页 |
| ·敏感性试验 | 第61-62页 |
| ·稳定性试验 | 第62页 |
| ·临床样品的检测 | 第62-63页 |
| ·各阳性的PCR产物序列测序和比对结果 | 第63-64页 |
| 5 讨论 | 第64-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
