壳聚糖酶的分离纯化及酶基因在解脂耶氏酵母中的表达
| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-28页 |
| 1 壳聚糖与壳寡糖概述 | 第12-14页 |
| 2 壳寡糖的制备 | 第14-15页 |
| 3 壳聚糖酶研究进展 | 第15-22页 |
| ·壳聚糖酶的发现与来源 | 第15页 |
| ·壳聚糖酶的分类 | 第15-17页 |
| ·壳聚糖酶的性质 | 第17-19页 |
| ·壳聚糖酶的分子生物学研究 | 第19-21页 |
| ·壳聚糖酶的功能及应用 | 第21-22页 |
| 4 解脂耶氏酵母表达系统 | 第22-27页 |
| ·宿主菌 | 第23页 |
| ·表达载体 | 第23-26页 |
| ·外源蛋白高效表达策略 | 第26-27页 |
| 5 研究内容及意义 | 第27-28页 |
| 第二章 壳聚糖酶的分离纯化 | 第28-38页 |
| 1 材料与仪器 | 第28-29页 |
| ·菌株 | 第28页 |
| ·材料与试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| 2 实验方法 | 第29-33页 |
| ·壳聚糖酶活力的测定 | 第29-31页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第31-32页 |
| ·壳聚糖酶的纯化 | 第32页 |
| ·壳聚糖酶分子量的测定 | 第32-33页 |
| ·壳聚糖酶N-端测序 | 第33页 |
| ·酶解产物分析 | 第33页 |
| 3 实验结果 | 第33-37页 |
| ·壳聚糖酶的纯化 | 第33-35页 |
| ·壳聚糖酶分子量测定 | 第35-36页 |
| ·壳聚糖酶N 端测序 | 第36页 |
| ·酶解产物分析 | 第36-37页 |
| 4 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 壳聚糖酶基因的克隆及序列分析 | 第38-45页 |
| 1 材料与试剂 | 第38-39页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·菌株与质粒 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| 2 实验方法 | 第39-41页 |
| ·基因组的提取 | 第39页 |
| ·引物设计 | 第39-40页 |
| ·PCR 扩增 | 第40页 |
| ·重组质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第41页 |
| 3 实验结果 | 第41-44页 |
| ·壳聚糖酶基因的获得 | 第41-42页 |
| ·壳聚糖酶基因序列分析 | 第42-44页 |
| 4 小结 | 第44-45页 |
| 第四章 壳聚糖酶基因的表达 | 第45-58页 |
| 1 实验设计 | 第45-47页 |
| ·表达载体pINA1317 及其宿主菌Polh | 第45-46页 |
| ·实验路线 | 第46-47页 |
| 2 材料与试剂 | 第47-48页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·菌株与质粒 | 第47-48页 |
| 3 实验方法 | 第48-53页 |
| ·壳聚糖酶基因的扩增 | 第48-49页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第49-51页 |
| ·Po1h 感受态细胞的转化 | 第51-53页 |
| 4 实验结果 | 第53-57页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第53-54页 |
| ·线性转化片段的制备 | 第54页 |
| ·Y.lipolytica Polh 转化 | 第54-57页 |
| 5 小结 | 第57-58页 |
| 第五章 重组壳聚糖酶的性质研究 | 第58-66页 |
| 1 材料与试剂 | 第58页 |
| ·培养基 | 第58页 |
| ·试剂 | 第58页 |
| 2 实验方法 | 第58-60页 |
| ·培养条件测定 | 第58-59页 |
| ·重组酶的纯化 | 第59页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第59页 |
| ·免疫印迹鉴定 | 第59页 |
| ·重组酶的性质研究 | 第59-60页 |
| 3 实验结果 | 第60-65页 |
| ·培养条件测定 | 第60-61页 |
| ·重组酶的纯化 | 第61-62页 |
| ·重组酶的鉴定 | 第62-63页 |
| ·重组酶的性质研究 | 第63-65页 |
| 4 小结 | 第65-66页 |
| 总结 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 个人简历 | 第77页 |
| 发表的学术论文 | 第77页 |
