| 中文摘要 | 第1-17页 |
| ABSTRACT | 第17-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-46页 |
| §1 蛋白质合成终止 | 第20-21页 |
| §2 肽链释放因子 | 第21-31页 |
| ·肽链释放因子的分类 | 第21页 |
| ·第一类肽链释放因子 | 第21-24页 |
| ·第一类肽链释放因子的结构 | 第21-22页 |
| ·第一类肽链释放因子的功能 | 第22-24页 |
| ·第二类肽链释放因子 | 第24-28页 |
| ·第二类肽链释放因子的结构 | 第24页 |
| ·第二类肽链释放因子的功能 | 第24-27页 |
| ·原核生物的RF3与真核生物的eRF3比较 | 第27-28页 |
| ·两类肽链释放因子的协同作用 | 第28-29页 |
| ·两类肽链释放因子的相互作用 | 第28页 |
| ·eRF3提高eRF1终止密码子的识别效率和肽酰tRNA水解 | 第28-29页 |
| ·eRF1促进eRF3的GTPase活性 | 第29页 |
| ·肽链释放因子的其他功能 | 第29-31页 |
| ·移框抑制 | 第29页 |
| ·肽链释放因子在细胞有丝分裂中的功能 | 第29-30页 |
| ·肽链释放因子与其它蛋白质的相互作用 | 第30-31页 |
| §3 纤毛虫 | 第31-35页 |
| ·实验材料-八肋游仆虫 | 第31-32页 |
| ·纤毛虫遗传密码子的变异 | 第32页 |
| ·纤毛虫作为分子生物学实验动物的优势及意义 | 第32-35页 |
| §4 参考文献 | 第35-46页 |
| 第二章 八肋游仆虫第二类肽链释放因子eRF3表达,纯化及鉴定 | 第46-61页 |
| §1 引言 | 第46页 |
| §2 材料与方法 | 第46-54页 |
| ·实验材料 | 第46-50页 |
| ·实验方法 | 第50-54页 |
| ·eRF3阅读框内无义密码子的突变 | 第50-52页 |
| ·重组表达质粒pGEX-6p-1-eRF3的构建 | 第52页 |
| ·蛋白GST-eRF3和eRF3的表达与纯化 | 第52-54页 |
| ·融合蛋白GST-eRF3的Western blotting分析 | 第54页 |
| §3 实验结果 | 第54-58页 |
| ·eRF3阅读框内无义密码子的突变 | 第54-55页 |
| ·重组表达质粒pGEX-6p-1-eRF3的构建 | 第55-56页 |
| ·蛋白GST-eRF3和eRF3的表达与纯化 | 第56页 |
| ·融合蛋白GST-eRF3的Western blotting分析 | 第56-58页 |
| ·小结 | 第58页 |
| §4 讨论 | 第58-59页 |
| §5 参考文献 | 第59-61页 |
| 第三章 八肋游仆虫两类肽链释放因子的相互作用研究 | 第61-73页 |
| §1 引言 | 第61页 |
| §2 材料与方法 | 第61-67页 |
| ·实验材料 | 第62-64页 |
| ·实验方法 | 第64-67页 |
| ·两类肽链释放因子的体内相互作用研究 | 第64-66页 |
| ·两类肽链释放因子的体外相互作用研究 | 第66-67页 |
| §3 实验结果 | 第67-70页 |
| ·两类肽链释放因子的体内相互作用研究 | 第67-69页 |
| ·酵母双杂交重组质粒pGBKT7-eRF1a和pGADT7-eRF3的构建 | 第67-68页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性分析 | 第68-69页 |
| ·两类肽链释放因子的体外相互作用研究 | 第69-70页 |
| ·重组表达质粒pRSETC-eRF1a的构建 | 第69页 |
| ·体外相互作用的pull down分析 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70页 |
| §4 讨论 | 第70-71页 |
| §5 参考文献 | 第71-73页 |
| 第四章 八肋游仆虫第二类肽链释放因子eRF3与第一类肽链释放因子eRF1a相互作用位点研究 | 第73-87页 |
| §1 引言 | 第73页 |
| §2 材料与方法 | 第73-76页 |
| ·实验材料 | 第73-74页 |
| ·实验方法 | 第74-76页 |
| ·eRF3基因内点突变和截短突变 | 第74-75页 |
| ·eRF1a与不同eRF3突变体相互作用的体内研究 | 第75页 |
| ·eRF1a与不同eRF3突变体相互作用的体外研究 | 第75-76页 |
| §3 实验结果 | 第76-82页 |
| ·eRF3基因内点突变和截短突变 | 第76页 |
| ·eRF1a与不同eRF3突变体相互作用的体内研究 | 第76-78页 |
| ·酵母双杂交重组质粒的构建 | 第76-78页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性分析 | 第78页 |
| ·eRF1a与不同eRF3突变体相互作用的体外研究 | 第78-82页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第78-80页 |
| ·体外相互作用的pull down分析 | 第80-82页 |
| ·小结 | 第82页 |
| §4 讨论 | 第82-86页 |
| §5 参考文献 | 第86-87页 |
| 第五章 八肋游仆虫第二类肽链释放因子eRF3 C端功能区的表达,纯化及光谱学研究 | 第87-97页 |
| §1 引言 | 第87-88页 |
| §2 材料与方法 | 第88-91页 |
| ·实验材料 | 第88页 |
| ·实验方法 | 第88-91页 |
| ·重组表达质粒pGEX-6p-1-eRF3C的构建 | 第88-89页 |
| ·蛋白eRF3C的表达与纯化 | 第89-90页 |
| ·融合蛋白GST-eRF3C的Western blotting分析 | 第90页 |
| ·eRF3C的荧光光谱的测定 | 第90页 |
| ·eRF3C的圆二色谱测定 | 第90-91页 |
| §3 实验结果 | 第91-95页 |
| ·重组表达质粒pGEX-6p-1-eRF3C的构建 | 第91页 |
| ·蛋白GST-eRF3C和eRF3C的表达与纯化 | 第91-92页 |
| ·融合蛋白GST-eRF3C的Western blotting分析 | 第92-93页 |
| ·eRF3C的荧光光谱 | 第93页 |
| ·eRF3C的圆二色谱 | 第93-94页 |
| ·小结 | 第94-95页 |
| §4 讨论 | 第95-96页 |
| §5 参考文献 | 第96-97页 |
| 第六章 八肋游仆虫第二类肽链释放因子eRF3C的GTPase活性研究 | 第97-109页 |
| §1 引言 | 第97-98页 |
| §2 材料与方法 | 第98-101页 |
| ·实验材料 | 第98页 |
| ·实验方法 | 第98-101页 |
| ·eRF3C结合GTP和GDP的活性研究 | 第98-99页 |
| ·eRF3C水解GTP的活性研究 | 第99-101页 |
| §3 实验结果 | 第101-105页 |
| ·eRF3C结合GTP和GDP的活性研究 | 第101-103页 |
| ·荧光光谱测定 | 第101页 |
| ·圆二色谱测定 | 第101-103页 |
| ·eRF3C水解GTP的活性研究 | 第103-105页 |
| ·高效液相色谱条件的优化 | 第103页 |
| ·GTP标准曲线的测定 | 第103页 |
| ·eRF3C水解GTP的活性测定 | 第103-105页 |
| ·小结 | 第105页 |
| §4 讨论 | 第105-107页 |
| §5 参考文献 | 第107-109页 |
| 总结 | 第109-111页 |
| 附录Ⅰ | 第111-113页 |
| 附录Ⅱ | 第113-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
