| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-28页 |
| 一、 接头蛋白NRBP 及转录激活蛋白 Jab1 的研究背景 | 第12-20页 |
| 1.N RBP 的结构和功能 | 第12-15页 |
| （1） NRBP 的结构 | 第12-13页 |
| （2） NRBP 的结合蛋白及功能 | 第13-15页 |
| 2. Jab1 与 COP9 复合物在细胞进程中的重要作用 | 第15-19页 |
| （1） COP9 复合物的组成和功能 | 第15-16页 |
| （2） Jab1 的结构和功能 | 第16-19页 |
| 3. 转录因子 AP-1 | 第19-20页 |
| 二、 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶：caspase-10 | 第20-28页 |
| 1.c aspase 的结构和功能 | 第20-25页 |
| （1） caspase 的结构和分类 | 第20-22页 |
| （2） caspase 参与的细胞凋亡途径 | 第22-24页 |
| （3） caspae 非凋亡途径的功能 | 第24-25页 |
| 2.c aspase-10 的结构和功能 | 第25-28页 |
| （1） caspase-10 的结构和剪切体形式 | 第25-26页 |
| （2） caspase-10 的功能 | 第26-27页 |
| （3） caspase-10 与疾病的关系 | 第27-28页 |
| 第二章 实验材料及仪器 | 第28-34页 |
| 一、 主要化学试剂及实验材料 | 第28-29页 |
| 二、 抗体 | 第29页 |
| 三、 引物、载体、菌株和细胞株 | 第29-33页 |
| 四、 主要仪器 | 第33-34页 |
| 第三章 实验方法 | 第34-49页 |
| 一、 相关质粒构建 | 第34-36页 |
| 二、 酵母双杂交筛选与NRBP结合的蛋白 | 第36-39页 |
| 三、 磷酸钙介导的细胞转染（HEK293 T 细胞） | 第39页 |
| 四、 免疫共沉淀（co-immunoprecipitaion） | 第39-40页 |
| 五、 免疫印迹检测（western-blotting） | 第40-41页 |
| 六、 NRBP 多克隆抗体的制备 | 第41-43页 |
| 七、 报告基因AP-1,NFAT 及NF-κB 检测系统 | 第43-46页 |
| 八、 流式细胞仪检测细胞表面蛋白CD69的表达 | 第46-47页 |
| 九、 RT-PCR 方法分析caspase-109 在组织及细胞株中的表达 | 第47-48页 |
| 十、 流式细胞分析仪检测细胞凋亡 | 第48-49页 |
| 第四章 NRBP与 Jab1在 AP-1信号通路中的作用 | 第49-70页 |
| 一、 实验结果 | 第49-66页 |
| 1. NRBP 与 Jab1 存在相互作用 | 第49-56页 |
| （1） 应用酵母双杂交系统筛选与 NRBP 相互作用的蛋白 | 第49-50页 |
| （2） 哺乳动物过量表达免疫共沉淀方法验证 NRBP 与Jab1 的相互作用 | 第50页 |
| （3） 内源 NRBP 与 Jab1 在哺乳动物细胞中相互作用 | 第50-54页 |
| （4） NRBP 的N 末端及C 末端均参与了其与Jab1 的相互作用 | 第54-56页 |
| 2. NRBP 抑制 Jab1 激活的 AP-1 报告基因活性 | 第56-58页 |
| 3. NRBP 抑制 Jab1 激活的c-Jun 的磷酸化水平 | 第58页 |
| 4. NRBP 特异性抑制外来物激活的AP-1 报告基因活性 | 第58-61页 |
| 5. NRBP 抑制TCR 或PMA/Ionomin 诱导的NFAT 报告基因活性 | 第61-66页 |
| （1） 过表达NRBP抑制TCR及PMA/ionomycine激活的NFAT报告基因活性 | 第62-64页 |
| （2） 过表达NRBP 不影响TCR 或PMA 激活的X 细胞表面蛋白CD69 的表达 | 第64-66页 |
| 二、 讨论 | 第66-69页 |
| 三、 小结 | 第69-70页 |
| 第五章 caspase-10 新剪切体的功能研究 | 第70-88页 |
| 一、 实验结果 | 第70-82页 |
| 1. caspase-109 基因cDNA 序列及结构分析 | 第70-75页 |
| （1） caspase-109 基因cDNA 序列的获得 | 第70-71页 |
| （2） caspase-109 与caspase-10 其它剪切体之间的序列比较及结构分析 | 第71-75页 |
| 2. caspase-109 的mRNA 在组织及细胞株中的表达 | 第75-76页 |
| 3. HeLa 及Jurkat 细胞中caspase-109 内源蛋白的检测 | 第76页 |
| 4. caspase-109 激活NF-κB 报告基因活性 | 第76-80页 |
| 5. 过表达caspase-109 诱导细胞凋亡 | 第80-82页 |
| 二、 讨论 | 第82-87页 |
| 三、 小结 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-99页 |
| 附录：主要试剂 | 第99-102页 |
| 致谢 | 第102-104页 |
| 攻读博士学位期间的文章及专利目录 | 第104-106页 |
