| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 绪论 | 第12-37页 |
| 1 假单胞菌的生物防治机理 | 第12-19页 |
| ·抗生素的作用 | 第13-19页 |
| ·吩嗪及其衍生物 | 第15-17页 |
| ·藤黄绿菌素 | 第17-18页 |
| ·2,4-二乙酰藤黄酚 | 第18页 |
| ·硝吡咯菌素 | 第18-19页 |
| ·氢氰酸 | 第19页 |
| ·粘质酰胺 | 第19页 |
| 2 双元组分调控系统 | 第19-23页 |
| ·双元组分调控系统 | 第19-23页 |
| ·RsmA 和RsmE | 第22页 |
| ·RsmY 和RsmZ | 第22-23页 |
| 3 菌群传感系统（Quorum Sensing System） | 第23-33页 |
| ·革兰氏阴性细菌（G-）中感知种内数量的QS 系统 | 第24-28页 |
| ·LuxR 蛋白以及qscR 基因 | 第28-31页 |
| ·结构和功能 | 第28页 |
| ·LuxR 蛋白的作用模型 | 第28-30页 |
| ·LuxR 型的阻遏物 | 第30页 |
| ·qscR 基因 | 第30-31页 |
| ·革兰氏阳性细菌（G+）中感知种内数量的QS 系统 | 第31-33页 |
| 4 信号分子介导的基因调控 | 第33-34页 |
| 5 泳动能力和群集运动能力 | 第34-35页 |
| 6 假单胞菌株M18 在生物防治方面的应用 | 第35-36页 |
| 7 研究目的和内容 | 第36-37页 |
| ·研究的目的 | 第36页 |
| ·研究的主要内容 | 第36-37页 |
| 第一章 qscR 基因突变菌株M18Q 的构建 | 第37-49页 |
| 1 假单胞菌M1895cR 基因PCR 扩增 | 第37-40页 |
| ·实验培养基、抗生素及菌株 | 第37页 |
| ·假单胞菌M18 基因组DNA 的提取 | 第37-38页 |
| ·引物和聚合酶链式（PCR）反应 | 第38页 |
| ·电泳定性检验DNA | 第38-39页 |
| ·PCR DNA 片段的回收纯化及测序 | 第39页 |
| ·M18 基因组DNA 抽提结果及qscR 基因片段PCR 和测序结果 | 第39-40页 |
| 2 假单胞菌M1895cR 基因的体外突变及突变株的构建 | 第40-49页 |
| ·材料与方法 | 第40-43页 |
| ·实验用菌株及质粒 | 第40-41页 |
| ·质粒DNA 抽提操作 | 第41页 |
| ·酶切反应和DNA 片段回收 | 第41页 |
| ·连接反应 | 第41-42页 |
| ·感受态细胞制备 | 第42页 |
| ·感受态细胞转化 | 第42-43页 |
| ·细菌接合转移 | 第43页 |
| ·突变株验证 | 第43页 |
| ·结果 | 第43-49页 |
| ·qscR 基因的克隆 | 第43-44页 |
| ·qscR 基因的体外突变 | 第44-46页 |
| ·qscR 基因突变菌株M18Q 的获得和验证 | 第46-49页 |
| 第二章 假单胞菌M1895cR 基因对PCA 和Plt 区别性调控研究 | 第49-57页 |
| 1 材料与方法 | 第49-52页 |
| ·菌株和质粒 | 第49页 |
| ·培养基及培养条件 | 第49-50页 |
| ·生长曲线测定及PCA 和Plt 的提取和定量测定 | 第50页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性测定 | 第50-52页 |
| ·原理 | 第50页 |
| ·试剂及工作液组分 | 第50-51页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性测定方法 | 第51-52页 |
| ·过表达质粒pME6032Q 构建 | 第52页 |
| 2. 结果 | 第52-56页 |
| ·PCA 和Plt 生物合成的动力学分析 | 第52-55页 |
| ·QscR 对PCA 生物合成基因表达的影响 | 第55-56页 |
| 3. 讨论 | 第56-57页 |
| 第三章 gacA 基因对两套吩嗪合成基因簇表达的调控 | 第57-73页 |
| 1. 转录融合法测定GacA 对phz 表达的影响 | 第57-62页 |
| ·材料与方法 | 第57-60页 |
| ·试验用菌株质粒及引物 | 第57-58页 |
| ·构建phzA1-lacZ 转录融合 | 第58页 |
| ·构建phzA2-lacZ 转录融合 | 第58-60页 |
| ·测定phzA1-lacZ 和phzA1-lacZ 转录融合的表达情况 | 第60页 |
| ·实验结果与讨论 | 第60-62页 |
| 2 用Real-Time PCR 的方法测定GacA 对phz 表达的调控作用 | 第62-73页 |
| ·材料与方法 | 第62-67页 |
| ·材料，菌株，质粒与引物 | 第62-63页 |
| ·UNIQ-10 柱式Trizol 提取总RNA | 第63-64页 |
| ·反转录 | 第64-65页 |
| ·PCR 检测RNA 是否被成功反转录 | 第65页 |
| ·内参基因rpOD 进行Real Time-PCR | 第65-66页 |
| ·常规PCR，结果显示GacA 对phz 表达的影响 | 第66-67页 |
| ·实验结果 | 第67-69页 |
| ·菌种：M18, M18G 的RT-PCR 结果 | 第67页 |
| ·菌种：M18G/pME6000, M18G/pXUG 的RT-PCR 结果 | 第67-68页 |
| ·GacA 对M18 phz 基因表达的影响 | 第68-69页 |
| ·讨论与分析 | 第69-73页 |
| 第四章 gacA 对M18 菌株次生代谢的其他影响 | 第73-85页 |
| 1 GacA 对M18 中quorum-sensing 系统的调控作用 | 第73-79页 |
| ·材料与方法 | 第73-76页 |
| ·试验用菌株质粒及引物 | 第73-74页 |
| ·构建rhlR | 第74-75页 |
| ·构建lasI | 第75页 |
| ·测定翻译融合质粒pME6015lasI，pME6015lasR，pMEIZ，pME6015rhlR在M18 和M18G 中的表达情况 | 第75-76页 |
| ·结果与讨论 | 第76-79页 |
| 2 假单胞菌M18gacA 基因对运动力的影响研究 | 第79-80页 |
| ·材料与方法 | 第79-80页 |
| ·实验培养基 | 第79页 |
| ·泳动能力( Swimming motility)的检测 | 第79页 |
| ·群集运动能力(swarming motility)的检测 | 第79-80页 |
| ·结果与讨论 | 第80页 |
| ·运动力检测结果 | 第80页 |
| 3 CAS 法检测gacA 对M18 铁载体分泌的影响 | 第80-85页 |
| ·材料与方法 | 第80-81页 |
| ·CAS 琼脂培养基的配制 | 第80-81页 |
| ·检测方法 | 第81页 |
| ·结果与讨论 | 第81-85页 |
| ·铁载体分泌检测结果 | 第81-82页 |
| ·实验分析与讨论 | 第82-85页 |
| 第五章 GacA 和QscR 的相互关系 | 第85-90页 |
| 1 材料与方法 | 第85-87页 |
| ·试验用菌株和质粒 | 第85页 |
| ·构建 qscR’-’lacZ 转录融合 | 第85-86页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性测定 | 第86-87页 |
| 2 结果与讨论 | 第87-90页 |
| 参考文献 | 第90-97页 |
| 附录 实验所用试剂及仪器设备 | 第97-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 发表论文 | 第100页 |
