| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-25页 |
| ·野油菜黄单胞菌概况 | 第10-15页 |
| ·野油菜黄单胞菌简介 | 第10-11页 |
| ·植物病原细菌与寄主的相互作用 | 第11页 |
| ·野油菜黄单胞菌一些重要的致病因子和致病相关基因 | 第11-15页 |
| ·胞嘧啶脱氨酶的研究进展 | 第15-24页 |
| ·嘧啶核苷酸参与细胞多种生化途径 | 第15-16页 |
| ·细菌嘧啶合成途径 | 第16-18页 |
| ·植物嘧啶合成途径 | 第18-20页 |
| ·胞嘧啶脱氨酶 | 第20-21页 |
| ·胞嘧啶脱氨酶的应用 | 第21-23页 |
| ·植物病原菌中胞嘧啶脱氨酶活性的研究进展 | 第23-24页 |
| ·本工作的目的与内容 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-39页 |
| ·材料 | 第25-30页 |
| ·本实验所用的菌株和质粒见表 | 第25-26页 |
| ·培养基及生长条件 | 第26-28页 |
| ·抗生素及其贮存、使用浓度 | 第28页 |
| ·溶液与缓冲液 | 第28-30页 |
| ·方法 | 第30-39页 |
| ·三亲本接合 | 第30页 |
| ·常规PCR反应 | 第30-33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第33页 |
| ·质粒的提取 | 第33页 |
| ·限制性内切酶酶切 | 第33-34页 |
| ·DNA连接 | 第34页 |
| ·电脉冲感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·转化 | 第34-35页 |
| ·总DNA的提取 | 第35页 |
| ·胞外多糖的检测 | 第35页 |
| ·胞外酶的检测 | 第35-36页 |
| ·植株的致病性试验 | 第36页 |
| ·细菌在完全培养基中的生长繁殖曲线的绘制 | 第36页 |
| ·细菌在不同氮源中的生长测定 | 第36页 |
| ·细菌在基本培养基中的生长繁殖曲线的绘制 | 第36页 |
| ·β-半乳糖苷酶(GUS)定性检测 | 第36-37页 |
| ·Xcc 8004基因组上目标基因的整合突变体的构建 | 第37-39页 |
| 第三章 结果与分析 | 第39-59页 |
| ·野油菜黄单胞菌中胞嘧啶脱氨酶及同源基因分析 | 第39-40页 |
| ·XC0670、XC1949突变体的获得 | 第40-41页 |
| ·突变体118H11的稀释纯化及PCR验证 | 第40-41页 |
| ·突变体0632nK1的稀释纯化及PCR验证 | 第41页 |
| ·突变体118H11、0632nK1的功能互补 | 第41-44页 |
| ·互补片段的扩增 | 第41-42页 |
| ·将互补片段连接到载体pLAFRJ上 | 第42-43页 |
| ·三亲本接合获得突变体 | 第43-44页 |
| ·突变体的致病性实验 | 第44-45页 |
| ·构建XC0670、XC1949双突变体 | 第45-47页 |
| ·PCR扩增同源片段 | 第45-46页 |
| ·将同源片段连接到pT18mob的位点上 | 第46页 |
| ·三亲接合获得双突变体 | 第46-47页 |
| ·构建XC0670、XC1949、XC3413缺失突变体。 | 第47-49页 |
| ·PCR扩增构建XC0670、XC3413缺失突变体的各个片段(图3.16) | 第47页 |
| ·构建4片段连接转化子 | 第47-48页 |
| ·三亲接合获得缺失突变体 | 第48-49页 |
| ·双突变体以及XC0670、XC3413缺失突变体致病性表型检测 | 第49-50页 |
| ·突变体的在不同培养基上的胞嘧啶脱氨酶活性检测。 | 第50-51页 |
| ·XC1367、XC0670、XC1949、XC3413基因的GUS活性检测 | 第51-54页 |
| ·PCR扩增XC1367、XC0670、XC1949、XC3413基因的GUS融合片段(图3.21) | 第51页 |
| ·转化子的构建(图3.22) | 第51-52页 |
| ·三亲接合获得XC1367、XC0670、XC1949、XC3413的GUS表达菌株 | 第52-53页 |
| ·三亲接合获得XC1367、XC0670、XC1949、XC3413的GUS表达菌株 | 第53-54页 |
| ·XC0670、XC1949、XC3413基因的组成型表达检测 | 第54页 |
| ·突变体的生长测定 | 第54-57页 |
| ·突变体在完全培养基中的生长测定 | 第54-55页 |
| ·突变体在基本培养基中的生长测定 | 第55-56页 |
| ·突变体在不同氮源中的生长测定 | 第56-57页 |
| ·突变体的过敏性(HR)反应 | 第57页 |
| ·突变体的胞外多糖、胞外蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶检测 | 第57-59页 |
| 第四章 讨论 | 第59-61页 |
| ·XC0670、XC1949和XC3413与codA基因的关系 | 第59页 |
| ·XC0670、XC1949和XC3413与致病性的关系 | 第59-60页 |
| ·XC0670、XC1949和XC3413与致病生化因子的关系 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
