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河北省部分地区奶牛流产病因分析和牛新孢子虫病PCR诊断方法的建立及应用

1 引言第1-18页
   ·新孢子虫病研究进展第9-18页
     ·N. caninum分类地位第9页
     ·N. caninum生活史及各阶段虫体形态第9-10页
     ·动物感染N. caninum临床症状第10-11页
     ·新孢子虫病诊断与检测方法第11-13页
     ·奶牛新孢子虫病的流行现状第13-14页
     ·动物感染N. caninum免疫学研究第14-16页
     ·奶牛新孢子虫病病理组织学变第16页
     ·奶牛新孢子虫病防治研究第16页
     ·新孢子虫病在中国的研究第16-18页
2 材料与方法第18-33页
   ·实验动物第18页
   ·待检样品的采集及处理第18页
     ·血样的采集及处理第18页
     ·粪样的采集及保存第18页
     ·流产胎儿病料的采集及处理第18页
   ·奶牛布鲁氏菌病的血清学及细菌学调查第18-21页
     ·主要材料第18-19页
     ·血清学检测第19-21页
     ·细菌学检测第21页
   ·奶牛感染T. gondii血清学调查第21-22页
     ·材料第21页
     ·操作程序第21-22页
     ·判定标准第22页
   ·奶牛BVDV抗原检测第22-23页
     ·双抗体夹心ELISA所用主要溶液第22页
     ·双抗体夹心ELISA检测步骤第22-23页
   ·奶牛新孢子虫病血清学调查第23页
     ·主要试剂及溶液第23页
     ·奶牛N. caninum抗体ELISA检测第23页
   ·PCR法检测Neospora caninum DNA第23-32页
     ·血液提取DNA所需主要试剂第23-24页
     ·聚合酶链式反应(PCR)所需主要试剂第24页
     ·基因克隆主要试剂第24页
     ·菌种与质粒载体第24-25页
     ·主要溶液的配制第25-26页
     ·引物的合成第26-27页
     ·血液DNA的提取第27-28页
     ·DNA浓度与纯度的检测第28页
     ·PCR扩增反应第28-29页
     ·PCR产物的电泳鉴定第29页
     ·PCR产物的纯化及纯化产物的酶切鉴定第29页
     ·Nc-5基因的克隆及测序第29-31页
     ·PCR方法特异性试验第31页
     ·PCR方法灵敏性试验第31页
     ·PCR方法重复性试验第31-32页
   ·PCR法检测河北地区奶牛感染新孢子虫的情况第32页
   ·主要仪器第32-33页
3 结果第33-40页
   ·奶牛布鲁氏菌病调查结果第33-34页
     ·血清学检测结果第33-34页
     ·细菌学检查结果第34页
   ·奶牛感染T.gondii调查结果第34-35页
   ·奶牛感染BVDV抗原检测结果第35页
   ·奶牛新孢子虫病流行病学调查结果第35-36页
   ·PCR方法检测NeosporacaninumDNA的结果第36-38页
     ·总DNA提取结果第36页
     ·PCR扩增结果第36-37页
     ·PCR产物的纯化及纯化产物的酶切鉴定结果第37页
     ·Nc-5基因的克隆及测序结果第37-38页
     ·PCR方法特异性结果第38页
     ·PCR方法敏感性扩增结果第38页
     ·重复性试验结果第38页
   ·PCR法检测河北省地区奶牛感染新孢子虫的情况第38-40页
4 讨论第40-43页
   ·流产病因分析及防制对策第40-41页
     ·牛布鲁氏杆菌病的情况第40页
     ·牛病毒性腹泻-粘膜病的情况第40页
     ·牛新孢子虫病的情况第40-41页
   ·PCR诊断牛新孢子虫病的建立第41-43页
     ·血液样品的保存和提取过程中对DNA质量的影响第41页
     ·Nc-5基因克隆第41-42页
     ·PCR方法特异性及敏感性分析第42-43页
5 结论第43-44页
参考文献第44-51页
在读期间发表的学术论文第51-52页
作者简历第52-53页
致谢第53-54页
附录第54-57页

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