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商陆抗病毒蛋白基因(PAP)转化烟草的研究

摘要第1-9页
1.文献综述第9-16页
   ·烟草基因工程发展简史第9页
   ·烟草抗病毒基因工程研究现状第9-10页
   ·烟草抗病毒基因工程的途径第10-13页
     ·抗病毒目的基因的选择第10-12页
       ·利用来自非植物的抗病毒基因第10-11页
       ·利用来自植物的抗病毒基因第11-12页
     ·目的基因导入烟草的转化体系第12页
     ·目的基因的分子检测第12-13页
     ·转基因植株的遗传稳定性第13页
   ·PAP基因及其应用第13-16页
     ·PAP基因的发现第13页
     ·PAP的结构特点及主要生物学功能第13-14页
     ·PAP蛋白的抗病毒活性及其作用机理第14-15页
       ·抗病毒活性第14-15页
         ·抑制植物病毒的活性第14页
         ·抗动物病毒活性第14-15页
       ·作用机理第15页
     ·PAP研究的进展及意义第15-16页
2.引言第16-17页
3.材料与方法第17-28页
   ·PAP基因对烟草的转化及Kan抗性植株的获得第17-21页
     ·材料第17页
       ·质粒第17页
       ·植物材料第17页
       ·培养基第17页
     ·试验方法第17-21页
       ·质粒转化LBA4404第17-18页
       ·质粒DNA提取与纯化第18-19页
       ·K326无菌苗的诱导第19页
       ·工程菌株的活化第19页
       ·转化第19-21页
       ·抗Kan植株的获得第21页
   ·抗Kan植株的分子检测第21-27页
     ·材料第21页
       ·供试材料第21页
       ·试剂盒第21页
       ·主要仪器与试剂第21页
     ·试验方法第21-27页
       ·叶片DNA的提取及PCR检测第21-24页
         ·DNA大量提取与纯化(SDS法)第21-23页
         ·质粒DNA提取与纯化第23页
         ·PCR检测第23-24页
       ·PCR-Southern杂交检测第24-25页
       ·叶片RNA提取及RT-PCR检测第25-27页
         ·植物基因组总RNA提取(Trizol)第25-26页
         ·RT-PCR检测第26-27页
   ·转基因植株的抗病实验第27-28页
     ·材料第27页
     ·试验方法第27-28页
       ·T1代植株的TMV室内活体攻毒试验第27页
       ·T1代植株的大田筛选第27-28页
4.结果和分析第28-34页
   ·农杆菌的转化第28页
   ·烟草叶片的转化第28-29页
     ·菌液浓度对抗Kan叶片转化率的影响第28-29页
     ·叶片浸泡时间对抗Kan叶片转化率的影响第29页
   ·抗Kan植株的筛选第29-31页
   ·抗Kan植株的分子检测第31-32页
     ·PCR检测及PCR-Southern杂交第31页
       ·RT-PCR检测第31-32页
   ·转基因植株的抗病实验第32-34页
     ·室内攻毒实验第32页
     ·大田筛选第32-34页
5.讨论与结论第34-36页
   ·讨论第34-35页
     ·影响转化的因素第34页
     ·PAP的细胞毒性第34-35页
   ·结论第35页
   ·需要继续研究解决的问题第35-36页
参考文献第36-42页
ABSTRACT第42页

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