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绵羊梅迪—维斯纳病毒核酸疫苗的制备及免疫学研究

中文摘要第1-13页
英文摘要第13-16页
1 引言第16-38页
   ·梅迪-维斯纳病概述第16-23页
     ·病性第16页
     ·历史与分布第16-17页
     ·临床症状与病理变化第17-19页
     ·致病机理第19-21页
     ·诊断第21页
     ·生态学第21-22页
     ·免疫与防制第22-23页
   ·MVV 及其疫苗研究进展第23-27页
     ·MVV 概述第23-24页
     ·MVV 的生物学特性第24页
     ·MVV 的分子生物学第24-26页
     ·MVV 保护性抗原基因及其疫苗研究进展第26-27页
   ·核酸疫苗及免疫佐剂的研究进展第27-37页
     ·核酸疫苗的概述第27-29页
     ·免疫佐剂概述第29-31页
     ·IL-2 的免疫佐剂作用第31-33页
     ·脂质体的研究进展第33-37页
   ·本项目研究的背景、内容及意义第37-38页
2 材料与方法第38-53页
   ·材料第38-41页
     ·主要试剂第38-39页
     ·主要仪器第39页
     ·病毒和细胞第39页
     ·菌株、载体与质粒第39-40页
     ·实验动物第40-41页
   ·实验方法第41-53页
     ·绵羊MVV 基因克隆及序列分析第41-42页
     ·MVV 保护性抗原基因的克隆和序列分析第42-44页
     ·MVV 核酸疫苗的构建及体外表达第44-47页
     ·MVV 核酸疫苗对小鼠免疫效果的研究第47-49页
     ·pcDNA-IL-2 的构建及体外表达第49-51页
     ·山羊IL-2 对MVV 核酸疫苗的免疫佐剂研究第51-53页
3 结果与分析第53-81页
   ·MVV 的培养及鉴定第53-54页
     ·MVV 对绵羊胎皮细胞及胎肺细胞的适应情况第53页
     ·病毒粒子的电镜检测结果第53-54页
     ·MVV 细胞抗原交叉实验第54页
   ·MVV 各段基因的克隆和序列分析第54-65页
     ·MVV 各片段PCR 扩增第54-55页
     ·MVV 主要基因片段序列测定及同源性比较第55-65页
   ·MVV 保护性抗原基因的克隆和序列分析第65-70页
     ·MVV gag 基因的PCR 扩增第65-66页
     ·pGEM T-gag 重组质粒的酶切鉴定第66页
     ·gag 基因序列测定及分析第66-70页
     ·MVV gag 编码蛋白的抗原性分析第70页
   ·重组真核表达质粒的构建及体外表达检测第70-73页
     ·pcDNA5/TO-gag 重组阳性克隆的鉴定第70-71页
     ·ELISA 法对重组质粒表达的检测第71-72页
     ·免疫组化法对重组质粒表达的检测第72页
     ·RT-PCR 法对重组质粒表达的检测第72页
     ·western-blot 法对重组质粒表达的检测第72-73页
   ·MVV 核酸疫苗对小鼠的免疫效果研究第73-75页
     ·MVV 抗体检测第73-74页
     ·小鼠淋巴细胞转化实验第74页
     ·小鼠淋巴细胞IL-4 和IFN-γ分泌水平检测第74-75页
   ·山羊 IL-2 对MVV 核酸疫苗免疫效果影响的研究第75-81页
     ·IL-2 基因PCR 扩增第75-76页
     ·pMD18-T-IL-2 重组阳性克隆的鉴定第76页
     ·IL-2 序列测定第76-77页
     ·pcDNA5/TO-IL-2 重组阳性克隆的鉴定第77页
     ·pcDNA5/TO-IL-2 转染COS-7 细胞的ELISA 检测第77页
     ·pcDNA5/TO-IL-2 转染COS-7 细胞的RT-PCR 检测第77-78页
     ·pcDNA5/TO-IL-2 作基因佐剂后MVV 抗体检测第78页
     ·pcDNA5/TO-IL-2 对淋巴细胞转化实验的影响第78-79页
     ·pcDNA5/TO-IL-2 作基因佐剂IL-4 和IFN-γ检测第79-81页
4 讨论第81-87页
   ·MVV 对绵羊细胞的感染及 MVV 的变异第81页
   ·MVV 主要保护性基因的克隆第81-82页
   ·重组质粒在真核细胞中的表达及检测第82-83页
   ·MVV 核酸疫苗对小鼠免疫作用第83-84页
     ·细胞免疫作用第83-84页
     ·体液免疫作用第84页
   ·佐剂对核酸疫苗的免疫效应第84-87页
     ·脂质体的免疫佐剂效应第85页
     ·IL-2 的基因佐剂效应第85-87页
5 结论第87-88页
致谢第88-89页
参考文献第89-98页
附录第98-119页
攻读博士期间发表的学术论文第119页

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