| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| ·美洲商陆抗病毒蛋白(PAP)的研究进展 | 第13-19页 |
| ·巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统的研究进展 | 第19-23页 |
| ·重叠延伸 PCR技术及其应用 | 第23-28页 |
| 第二章 缺失型美洲商路抗病毒蛋白(PAP)基因的人工合成 | 第28-50页 |
| ·材料与方法 | 第28-39页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-47页 |
| ·缺失型PAP基因密码子的修改 | 第39-42页 |
| ·缺失型PAP基因的人工合成 | 第42-45页 |
| ·目的碱基的缺失突变 | 第45-47页 |
| ·结论与讨论 | 第47-50页 |
| 第三章 毕赤酵母分泌型表达载体的构建 | 第50-59页 |
| ·材料与方法 | 第50-55页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-57页 |
| ·质粒 T-easy-PAPs及pPIC9k的双酶切结果 | 第55页 |
| ·重组载体质粒的PCR及双酶切鉴定 | 第55-56页 |
| ·重组载体籽粒的测序结果与分析 | 第56-57页 |
| ·结论与讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 PAPs基因在毕赤酵母中的表达及其产物的活性测定 | 第59-79页 |
| ·材料与方法 | 第59-66页 |
| ·材料 | 第59-60页 |
| ·方法 | 第60-66页 |
| ·结果与分析 | 第66-74页 |
| ·载体质粒的线性化 | 第66-67页 |
| ·电转化及重组子的筛选鉴定 | 第67-68页 |
| ·甲醇诱导外源基因的表达及 SDS-PAGE电泳 | 第68-69页 |
| ·表达产物的 Western-blot分析 | 第69页 |
| ·pH值对缺失型PAP表达量的影响 | 第69-71页 |
| ·甲醇浓度对缺失型PAP表达量的影响 | 第71-72页 |
| ·诱导时间对缺失型PAP表达量的影响 | 第72页 |
| ·表达产物的抗病毒活性 | 第72-74页 |
| ·结论与讨论 | 第74-79页 |
| ·重组蛋白的糖基化 | 第74页 |
| ·α-信号肽引导的分泌性表达 | 第74页 |
| ·影响外源蛋白表达水平的因素 | 第74-77页 |
| ·亟待解决的问题 | 第77-79页 |
| 结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-87页 |
| 附录 | 第87-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第92-93页 |
| 论文图表统计 | 第93页 |
