| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 缩略语/符号说明 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-16页 |
| 研究现状、成果 | 第13-14页 |
| 研究目的、方法 | 第14-16页 |
| 一、部分重组质粒pDON-AI-2-Neo-HSV1-tk的构建及逆转录病毒包装 | 第16-40页 |
| ·材料 | 第16-19页 |
| ·药品与试剂 | 第16-17页 |
| ·仪器设备 | 第17页 |
| ·溶液及配制 | 第17-19页 |
| ·方法 | 第19-30页 |
| ·重组质粒pDON-AI-2-Neo-HSV1-tk的构建 | 第19-27页 |
| ·设计HSV1-tk基因全序列引物 | 第19-20页 |
| ·质粒pHSV106的细菌扩增及提取 | 第20-21页 |
| ·PCR扩增HSV1-tk基因片段并引入相应酶切位点 | 第21页 |
| ·纯化PCR获得的目的基因片段HSV1-tk | 第21-22页 |
| ·HSV1-tk基因片段与pMD18-T载体连接 | 第22-23页 |
| ·连接质粒的扩增、提取及鉴定 | 第23-24页 |
| ·连接质粒pMD18-T/tk和载体pDON-AI-2-Neo提取、纯化 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pDON-AI-2-Neo-HSV1-tk的构建 | 第25-27页 |
| ·逆转录病毒的包装 | 第27-30页 |
| ·包装细胞293T的培养、扩增 | 第27页 |
| ·重组质粒pDON-AI-2-Neo-HSV1-tk的逆转录病毒包装 | 第27-28页 |
| ·逆转录病毒基因组鉴定 | 第28-30页 |
| ·结果 | 第30-36页 |
| ·重组质粒pDON-AI-2-Neo-HSV1-tk的构建 | 第30-35页 |
| ·HSV1-tk基因片段的扩增 | 第30页 |
| ·HSV1-tk基因片段与pMD18-T载体连接 | 第30-34页 |
| ·HSV1-tk基因片段与载体pDON-AI-2-Neo的连接 | 第34-35页 |
| ·重组逆转录病毒基因组鉴定 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 二、HSV1-tk基因转染A549细胞及A549-tk单克隆细胞株建立 | 第40-61页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·药品与试剂 | 第40页 |
| ·仪器设备 | 第40-41页 |
| ·溶液及配制 | 第41页 |
| ·实验方法和步骤 | 第41-49页 |
| ·肺腺癌A549细胞的培养 | 第41-42页 |
| ·A549细胞的复苏、培养 | 第41页 |
| ·A549细胞传代扩增 | 第41页 |
| ·细胞计数 | 第41-42页 |
| ·A549细胞的冻存 | 第42页 |
| ·逆转录病毒感染A549细胞 | 第42-44页 |
| ·G418对A549细胞最适浓度的确定 | 第42页 |
| ·逆转录病毒感染A549细胞及G418筛选阳性表达细胞 | 第42-43页 |
| ·阳性表达HSV1-tk基因的A549细胞克隆团的鉴定 | 第43-44页 |
| ·单克隆细胞株的建立 | 第44-49页 |
| ·有限稀释单克隆法培养阳性表达HSV1-tk的A549细胞 | 第44-45页 |
| ·稳定农达HSV1-tk基因的A549-tk细胞株鉴定 | 第45-48页 |
| ·A549细胞与A549-tk细胞形态观察及生长特性测定 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-55页 |
| ·A549细胞的培养 | 第49-50页 |
| ·正常A549细胞的培养 | 第49页 |
| ·G418筛选的最适浓度确定 | 第49-50页 |
| ·转染A549细胞 | 第50-52页 |
| ·A549-tk单克隆细胞株培养 | 第52-55页 |
| ·A549-tk细胞单克降株的建立 | 第52-53页 |
| ·A549-tk单克隆株中tk基因表达的鉴定 | 第53-54页 |
| ·正常A549细胞和A549-tk细胞的生长特征比较 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 三、转染动物模型的建立 | 第61-66页 |
| ·实验材料 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-62页 |
| ·建立A549-tk细胞株动物模型 | 第61页 |
| ·动物模型的HSV1-tk基因的表达检测 | 第61-62页 |
| ·结果 | 第62-64页 |
| ·A549-tk和A549的Balb/c裸鼠肿瘤模型 | 第62页 |
| ·动物模型组织的RT-PCR鉴定 | 第62-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 创新性评价与不足 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第74-75页 |
| 综述 | 第75-90页 |
| 参考文献 | 第87-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
