| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 植物病虫害的生物防治 | 第11-12页 |
| 2 植物病虫害微生物防治的研究进展 | 第12-17页 |
| ·植物病害的微生物防治 | 第12-15页 |
| ·植物虫害的微生物防治 | 第15-17页 |
| 3 基因工程技术在生防微生物遗传改良中的应用 | 第17-20页 |
| ·微生物抑菌机制的研究和抗性基因的克隆 | 第17页 |
| ·抗性基因在其他细菌中的表达 | 第17-18页 |
| ·抗性基因的遗传改造 | 第18-19页 |
| ·微生物生防工程菌株的示踪 | 第19-20页 |
| 引言 | 第20-21页 |
| 第一章 利用绿色荧光蛋白(GFP)探测启动子F1在短小芽孢杆菌DX01中转录活性与转录阶段的研究 | 第21-33页 |
| 1 材料 | 第21-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要的仪器和设备 | 第21-23页 |
| 2 方法 | 第23-29页 |
| ·细菌培养条件 | 第23页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第23页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第23页 |
| ·大肠杆菌小量质粒的提取 | 第23-24页 |
| ·质粒及PCR产物的酶切反应 | 第24页 |
| ·酶切产物的回收与连接 | 第24-25页 |
| ·短小芽孢杆菌的电击转化 | 第25-26页 |
| ·短小芽孢杆菌DX01菌株基因组DNA的提取 | 第26页 |
| ·短小芽孢杆菌DX01菌株质粒的提取 | 第26页 |
| ·短小芽孢杆菌组成型启动子活性片段F1的亚克隆与gfp基因的克隆 | 第26-27页 |
| ·gfp基因组成型穿梭表达载体pHY300-F1gfp的构建与转化 | 第27-28页 |
| ·荧光检测 | 第28页 |
| ·短小芽孢杆菌DX01(pHY300-F1gfp)细胞群的荧光激活细胞分检分析 | 第28-29页 |
| 3 结果与讨论 | 第29-33页 |
| ·短小芽孢杆菌DX01启动子pCP01功能片段F1的亚克隆 | 第29-30页 |
| ·含表达载体pHY300-F1gfp的短小芽孢杆菌荧光检测 | 第30-31页 |
| ·含gfp基因表达载体的短小芽孢杆菌DX01的流式细胞仪荧光激活细胞分检分析 | 第31-33页 |
| 第二章 枯草芽孢杆菌蛋白酶、果聚糖蔗糖酶信号肽及短小芽孢杆菌核糖核酸酶信号肽在DX01中引导外源蛋白分泌的能力的研究 | 第33-45页 |
| 1 材料与方法 | 第33-38页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·菌株和质粒 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-38页 |
| ·枯草芽孢杆菌168菌株基因组DNA的提取 | 第34页 |
| ·短小芽孢杆菌DX01核糖核酸酶及其信号肽序列的克隆 | 第34-35页 |
| ·枯草芽孢杆菌蛋白酶和果聚糖蔗糖酶信号肽序列的克隆 | 第35页 |
| ·大肠杆菌成熟β-内酰胺酶序列的克隆 | 第35页 |
| ·在启动子F1控制下短小芽孢杆菌DX01β-内酰胺酶表达分泌载体的构建 | 第35-37页 |
| ·短小芽孢杆菌DX01β-内酰胺酶活性的测定 | 第37页 |
| ·GFP组成型表达分泌载体pHY300-F1Lgfp及pHY300-F1Rgfp的构建 | 第37页 |
| ·GFP在短小芽孢杆菌DX01中表达、分泌的免疫印迹检测 | 第37-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-45页 |
| ·短小芽孢杆菌DX01核糖核酸酶及其信号肽序列的克隆 | 第38-40页 |
| ·枯草芽孢杆菌蛋白酶和果聚糖蔗糖酶信号肽序列的克隆 | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌成熟β-内酰胺酶序列的克隆 | 第41-42页 |
| ·短小芽孢杆菌DX01(pHY300-F1RBla)、DX01(pHY300-F1SBla)和DX01(pHY300-F1LBla)β-内酰胺酶活性的测定 | 第42-43页 |
| ·GFP在短小芽孢杆菌DX01中表达、分泌的免疫印迹分析 | 第43-44页 |
| ·小结与讨论 | 第44-45页 |
| 第三章 萝卜抗真菌蛋白1(Rs-AFP1)在短小芽孢杆菌DX01中表达、分泌的研究 | 第45-55页 |
| 1 材料 | 第45-46页 |
| ·萝卜品种 | 第45-46页 |
| ·真菌菌种 | 第46页 |
| ·细菌与载体 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-51页 |
| ·萝卜种子培养条件 | 第46页 |
| ·真菌培养条件 | 第46页 |
| ·萝卜幼苗总DNA抽提方法 | 第46-47页 |
| ·萝卜幼苗总RNA的提取 | 第47-48页 |
| ·RNA提取过程中的注意事项 | 第47页 |
| ·提取方法 | 第47-48页 |
| ·Rs-afp1 cDNA第一链的合成 | 第48页 |
| ·RT-PCR扩增Rs-afp1 cDNA | 第48页 |
| ·表达分泌穿梭载体pHY300-F1LgAFP及pHY300-F1LAFP的构建 | 第48-49页 |
| ·GFP融合蛋白在短小芽孢杆菌DX01中表达、分泌的免疫印迹检测 | 第49页 |
| ·工程菌DX01(pHY300-F1LAFP1)对病原真菌的拮抗作用 | 第49-51页 |
| 3 结果与讨论 | 第51-55页 |
| ·Rs-afp1基因cDNA片断的RT-PCR克隆 | 第51-52页 |
| ·GFP-Rs-AFP1融合蛋白在短小芽孢杆菌DX01中表达、分泌的免疫印迹检测 | 第52-53页 |
| ·工程菌DX01(pHY300-F1LAFP1)对病原真菌的拮抗作用 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 发表文章 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
