| 文献综述 | 第1-24页 |
| 1 IL-2的分子结构与表达调控 | 第10-11页 |
| 2 IL-2受体的结构及特性 | 第11-12页 |
| 3 IL-2的生物学功能 | 第12-14页 |
| 4 IL-2的生物学活性 | 第14-15页 |
| 5 IL-2的应用 | 第15-22页 |
| ·IL-2在人医上的应用 | 第15-19页 |
| ·在诊断疾病中的应用 | 第16页 |
| ·作为佐剂 | 第16-17页 |
| ·作为免疫治疗剂 | 第17-18页 |
| ·IL-2与其他因子联用 | 第18-19页 |
| ·IL-2在兽医领域中的应用 | 第19-22页 |
| ·免疫佐剂功能 | 第19-20页 |
| ·作为免疫治疗剂 | 第20页 |
| ·构建新型重组基因工程疫苗 | 第20-22页 |
| ·应用IL-2的副作用 | 第22页 |
| 6 本实验的目的和意义 | 第22-24页 |
| 实验部分 | 第24-46页 |
| 第一章 荣昌猪IL-2基因的克隆与序列分析 | 第24-37页 |
| 1 材料与方法 | 第24-31页 |
| ·主要试剂与试验动物 | 第24页 |
| ·溶液配制 | 第24-25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化用溶液 | 第24页 |
| ·质粒大量提取所用溶液 | 第24-25页 |
| ·细胞培养用液 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-31页 |
| ·淋巴细胞的分离与培养 | 第25-26页 |
| ·淋巴细胞总RNA的提取 | 第26页 |
| ·白细胞介素-2基因的扩增 | 第26-27页 |
| ·白细胞介素-2基因的克隆 | 第27-29页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第29-30页 |
| ·序列测定 | 第30-31页 |
| ·荣昌猪IL-2基因的生物信息学分析 | 第31页 |
| 2 结果 | 第31-34页 |
| ·荣昌猪IL-2基因的RT-PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的PCR和酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第33页 |
| ·生物信息学分析 | 第33-34页 |
| ·IL-2基因的序列分析 | 第33页 |
| ·IL-2基因的多序列比对分析 | 第33页 |
| ·同源性分析 | 第33-34页 |
| ·进化树构建 | 第34页 |
| 3 讨论 | 第34-37页 |
| ·关于淋巴细胞培养 | 第34-35页 |
| ·关于纯的RNA的获得和RNA降解的防止 | 第35页 |
| ·关于cDNA序列的生物信息学分析方法 | 第35-37页 |
| 第二章 荣昌猪IL-2基因的原核表达 | 第37-46页 |
| 1 材料与方法 | 第37-41页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·实验所用溶液及其配制 | 第37-38页 |
| ·SDS-PAGE所用溶液的配制 | 第37-38页 |
| ·包涵体提取用溶液 | 第38页 |
| ·实验仪器 | 第38页 |
| ·PET-32a(+)-IL-2表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·质粒的提取 | 第38页 |
| ·重组IL-2质粒、PET-32(a)+质粒分别双酶切 | 第38-39页 |
| ·酶切回收的重组IL-2cDNA、PET-32(a)+质粒的连接 | 第39页 |
| ·感受态大肠杆菌BL21(DE3)的制备 | 第39页 |
| ·转化 | 第39页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定和酶切鉴定 | 第39页 |
| ·重组IL-2的表达 | 第39-41页 |
| ·IPTG诱导的重组表达菌的表达检测 | 第39页 |
| ·重组IL-2的表达诱导与样本处理 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第40页 |
| ·重组猪IL-2表达蛋白的获取 | 第40页 |
| ·重组猪IL-2蛋白生物学活性测定 | 第40-41页 |
| 2 结果 | 第41-44页 |
| ·重组表达质粒PET-32(a)+-IL-2的构建与鉴定 | 第41-42页 |
| ·IPTG诱导的重组表达菌的表达检测 | 第42页 |
| ·重组表达质粒的SDS-PAGE电泳 | 第42-43页 |
| ·目的蛋白的表达量分析 | 第43-44页 |
| ·重组猪IL-2蛋白的生物学活性检测 | 第44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| ·关于重组菌的表达和活性检测 | 第44-45页 |
| ·关于SDS-PAGE电泳 | 第45-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附录 | 第53-56页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文情况 | 第56页 |
