| 1 文献综述 | 第1-21页 |
| ·引言 | 第8页 |
| ·棉纤维发育过程 | 第8-11页 |
| ·纤维原始细胞的分化和突起 | 第9页 |
| ·纤维伸长 | 第9-10页 |
| ·纤维细胞的次生壁增厚 | 第10-11页 |
| ·脱水成熟 | 第11页 |
| ·微管结合蛋白的研究进展 | 第11-15页 |
| ·微管的动力学特征 | 第11-12页 |
| ·微管结合蛋白MAP1 | 第12-13页 |
| ·LC3研究进展 | 第13-14页 |
| ·微管的去稳定因子 | 第14-15页 |
| ·植物中的微管结合蛋白 | 第15页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的表达 | 第15-20页 |
| ·转录起始与终止对基因表达的调控 | 第16-17页 |
| ·翻译水平的调控 | 第17-18页 |
| ·密码子的使用频率 | 第18-19页 |
| ·外源表达蛋白的降解 | 第19页 |
| ·融合蛋白的表达 | 第19-20页 |
| ·本研究的目标 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-33页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·常用试剂及溶液配制 | 第21-23页 |
| ·质粒与宿主菌 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·常用溶液及缓冲液的配制 | 第21页 |
| ·RNA提取缓冲液的配制 | 第21-22页 |
| ·DNA提取缓冲液的配制 | 第22页 |
| ·CaCl_2法制备大肠杆菌感受态所需试剂和溶液的配制: | 第22页 |
| ·大肠杆菌转化所需试剂和溶液的配制 | 第22页 |
| ·碱裂解法小量制备质粒所需试剂和溶液的配制 | 第22-23页 |
| ·SDS—PAGE所需的试剂和溶液的配制 | 第23页 |
| ·Western杂交所需的试剂和溶液的配制 | 第23页 |
| ·表达蛋白纯化相关溶液的配制 | 第23页 |
| ·RNA的提取 | 第23-25页 |
| ·CTAB-PVP法提取RNA的操作步骤 | 第24页 |
| ·RNA电泳检测 | 第24页 |
| ·RNA定量 | 第24-25页 |
| ·实时定量PCR反应 | 第25-26页 |
| ·反转录：cDNA第一链的合成 | 第25页 |
| ·引物设计 | 第25页 |
| ·实时定量PCR反应 | 第25-26页 |
| ·棉花叶片总DNA的提取 | 第26页 |
| ·棉花叶片总DNA的粗提 | 第26页 |
| ·棉花叶片总DNA的纯化 | 第26页 |
| ·棉花总DNA的电泳检测 | 第26页 |
| ·棉花总DNA定量 | 第26页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第26-29页 |
| ·引物的设计与PCR的扩增 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第27页 |
| ·PCR产物连接到pGEM-Teasy载体 | 第27页 |
| ·连接产物对大肠杆菌的转化 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第28页 |
| ·碱裂解法小量制备质粒DNA | 第28页 |
| ·质粒的酶切、回收与连接 | 第28-29页 |
| ·原核表达与目的蛋白纯化 | 第29-32页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的表达 | 第29-30页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺电泳技术 | 第30页 |
| ·亲和柱层析分离目的蛋白 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE纯化目的蛋白 | 第31页 |
| ·透析袋的处理方法 | 第31页 |
| ·电洗脱法回收凝胶中的蛋白质 | 第31页 |
| ·蛋白质浓度的定量 | 第31-32页 |
| ·抗血清的获得 | 第32页 |
| ·Western印迹的实验方法 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-42页 |
| ·棉花不同组织RNA的提取 | 第33-34页 |
| ·实时定量PCR的定量结果 | 第34-38页 |
| ·棉花叶片总DNA的提取 | 第38-39页 |
| ·原核表达载体的构建(PCR验证、酶切验证、测序) | 第39-40页 |
| ·GhMAP1-LC3基因的诱导表达 | 第40-41页 |
| ·抗血清纯度的检验 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-46页 |
| ·以SYBR-GreenⅠ作为实时定量PCR荧光染料的特点 | 第42页 |
| ·影响MAP1-LC3在大肠杆菌中表达的因素 | 第42-44页 |
| ·原核表达诱导条件的优化 | 第42-43页 |
| ·GhMAP1-LC3基因在大肠杆菌中不能获得高效表达原因的分析 | 第43-44页 |
| ·LC3在棉纤维发育中生理功能的讨论 | 第44-45页 |
| ·展望 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
