胡杨甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆及功能分化研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 引言 | 第9-21页 |
| ·甜菜碱在植物抗逆过程中发挥的作用 | 第9-10页 |
| ·BADH基因简介 | 第10-12页 |
| ·BADH基因的结构特征 | 第10页 |
| ·BADH基因在体内的亚细胞定位 | 第10-11页 |
| ·植物BADH基因的同源性及系统进化 | 第11页 |
| ·BADH基因的转录后加工 | 第11-12页 |
| ·BADH与胁迫相关的研究进展 | 第12-17页 |
| ·BADH的抗逆机制 | 第12-13页 |
| ·植物BADH与盐胁迫相关的研究 | 第13-17页 |
| ·植物BADH对干旱和温度胁迫的响应 | 第17页 |
| ·BADH在其他方面的应用 | 第17-18页 |
| ·BADH研究的展望 | 第18-19页 |
| ·胡杨BADH研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-33页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·工具酶和试剂 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-33页 |
| ·基因的搜索和拼接 | 第21页 |
| ·蛋白质结构域分析 | 第21页 |
| ·克隆引物设计 | 第21-23页 |
| ·总DNA提取 | 第23页 |
| ·总RNA提取 | 第23页 |
| ·RNA的DNaseⅠ处理 | 第23-24页 |
| ·反转录 | 第24-25页 |
| ·PCR扩增 | 第25页 |
| ·基因组PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·DNA回收 | 第26页 |
| ·连接 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌JM109感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·菌落PCR检验阳性克隆与保菌、测序 | 第28-29页 |
| ·重组载体质粒提取 | 第29页 |
| ·系统发生关系分析 | 第29页 |
| ·胡杨BADH基因的组织表达模式分析 | 第29-30页 |
| ·表达引物的设计 | 第30页 |
| ·基因克隆与测序 | 第30页 |
| ·重组质粒提取 | 第30-31页 |
| ·双酶切 | 第31页 |
| ·目的基因与表达载体的连接 | 第31-32页 |
| ·重组表达载体的转化 | 第32页 |
| ·融合蛋白的原核表达 | 第32-33页 |
| ·胡杨BADH蛋白的酶学性质测定 | 第33页 |
| ·胡杨BADH蛋白热力学稳定性的测定 | 第33页 |
| ·胡杨BADH蛋白结构模拟 | 第33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-52页 |
| ·胡杨BADH基因序列的鉴定与命名 | 第33-34页 |
| ·胡杨基因组DNA及总RNA的提取 | 第34-35页 |
| ·PCR扩增 | 第35-37页 |
| ·克隆载体构建 | 第37-38页 |
| ·测序与序列分析 | 第38-41页 |
| ·基因结构分析 | 第41页 |
| ·植物BADH蛋白的序列比对与相似性分析 | 第41-44页 |
| ·系统进化分析 | 第44-46页 |
| ·胡杨不同组织RNA提取 | 第46页 |
| ·RT-PCR检测 | 第46-47页 |
| ·表达载体构建 | 第47-48页 |
| ·融合蛋白的表达 | 第48-49页 |
| ·蛋白表达形式的鉴定 | 第49页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| ·酶活测定 | 第50页 |
| ·胡杨BADH蛋白的热力学稳定性分析 | 第50-51页 |
| ·胡杨BADH蛋白三维结构模建 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 5 总结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 个人简介 | 第60-61页 |
| 导师简介 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
