| 摘要 | 第1-7页 |
| 文献综述 | 第7-17页 |
| 引言 | 第17-18页 |
| 材料与方法 | 第18-34页 |
| 1 材料 | 第18-21页 |
| ·实验动物 | 第18页 |
| ·新城疫病毒B_(95)株 | 第18页 |
| ·质粒 | 第18页 |
| ·菌种 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·主要工具酶 | 第18-19页 |
| ·引物 | 第19页 |
| ·主要溶液的配制 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| 2 方法 | 第21-34页 |
| ·技术路线 | 第21-23页 |
| ·重组真核表达载体的构建方案 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-34页 |
| ·NDV B_(95)株的增殖: | 第24页 |
| ·NDV B_(95)株尿囊液的浓缩 | 第24页 |
| ·NDV B_(95)株总RNA的提取 | 第24页 |
| ·NDV B_(95)株F基因的RT-PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·PCR产物与PGEM-T-easy克隆载体的连接和转化 | 第25-26页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第26-27页 |
| ·NDV B_(95)株F基因核苷酸序列的测定及分析 | 第27页 |
| ·小量制备真核表达载体PcDNA3.1(+)质粒 | 第27页 |
| ·真核表达质粒PcDNA-F的构建 | 第27-28页 |
| ·重组真核表达质粒PcDNA-F的鉴定 | 第28页 |
| ·重组真核表达质粒PcDNA-F的大量制备和纯化 | 第28-29页 |
| ·重组真核表达质粒PcDNA-F的免疫 | 第29-30页 |
| ·实验鸡免疫后免疫指标的监测 | 第30-34页 |
| 结果与分析 | 第34-46页 |
| 1 NDV B_(95)株的增殖和浓缩 | 第34页 |
| 2 NDV B_(95)株RNA的提取 | 第34页 |
| 3 NDV B_(95)株F基因的RT-PCR扩增 | 第34页 |
| 4 NDV B_(95)株F基因的克隆与鉴定 | 第34-36页 |
| ·煮沸法快速检测阳性克隆 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第35页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 5 NDV B_(95)株F基因核苷酸序列的测定及同源性分析 | 第36-39页 |
| 6 NDV B_(95)株F蛋白氨基酸序列分析 | 第39-41页 |
| ·NDV B_(95)株F蛋白抗原表位及裂解位点序列 | 第39-40页 |
| ·NDV B_(95)株F蛋白疏水区及糖基化位点 | 第40页 |
| ·NDV B_(95)株F基因系统发育进化树 | 第40-41页 |
| 7 真核表达质粒PcDNA-F的构建和鉴定 | 第41-42页 |
| ·真核表达质粒PcDNA-F的PCR鉴定 | 第41页 |
| ·真核表达质粒PcDNA-F的酶切鉴定 | 第41-42页 |
| 8 实验鸡母源抗体衰减情况 | 第42-43页 |
| 9 免疫后免疫指标的检测 | 第43-45页 |
| ·免疫后体液免疫指标的检测 | 第43页 |
| ·免疫后细胞免疫指标的检测 | 第43-45页 |
| 10 免疫鸡攻毒试验 | 第45-46页 |
| 讨论 | 第46-49页 |
| 1 NDV B_(95)株F基因的扩增和测序 | 第46页 |
| ·NDV B_(95)株F基因的PCR扩增 | 第46页 |
| ·NDV B_(95)株F基因核苷酸序列的测定及同源性分析 | 第46页 |
| 2 NDV B_(95)株真核表达载体的构建 | 第46-47页 |
| 3 新城疫核酸疫苗的免疫 | 第47-49页 |
| ·载基因脂质体的制备 | 第47页 |
| ·新城疫核酸疫苗免疫后体液免疫指标的检测 | 第47-48页 |
| ·新城疫核酸疫苗免疫后细胞免疫指标的检测 | 第48-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录 | 第56-65页 |
| 附录A: NDV B_(95)株F基因核酸同源性比较 | 第56-63页 |
| 附录B: NDV B_(95)株F蛋白氨基酸同源性比较 | 第63-65页 |
| 英文摘要 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
