| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-13页 |
| 符号说明 | 第13-16页 |
| 1． 引言 | 第16-41页 |
| 1．1 RNA沉默的机制及其应用 | 第16-31页 |
| 1．1．1 转录水平沉默和转录后水平的沉默 | 第16-17页 |
| 1．1．2 RNA沉默现象的发现 | 第17-18页 |
| 1．1．3 RNA沉默的基因 | 第18-21页 |
| 1．1．4 RNA沉默的机制 | 第21-26页 |
| 1．1．5 RNA沉默现象的生物学意义 | 第26-30页 |
| 1．1．6 展望 | 第30-31页 |
| 1．2 植物抗病毒基因工程 | 第31-40页 |
| 1．2．1 非病毒来源基因介导的抗病性 | 第31-32页 |
| 1．2．1．1 利用植物抗病基因获得的抗病性 | 第31页 |
| 1．2．1．2 核糖体失活蛋白基因获得的抗病性 | 第31-32页 |
| 1．2．1．3 利用抗体基因获得的抗病性 | 第32页 |
| 1．2．2 病毒来源基因介导的抗病性 | 第32-40页 |
| 1．2．2．1 衣壳蛋白基因介导的抗病性 | 第32-33页 |
| 1．2．2．2 复制酶基因介导的抗病性 | 第33-34页 |
| 1．2．2．3 运动蛋白基因介导的抗病性 | 第34-35页 |
| 1．2．2．4 病毒反义RNA介导的抗病性 | 第35页 |
| 1．2．2．5 病毒卫星RNA介导的抗病性 | 第35-36页 |
| 1．2．2．6 核酶基因介导的抗病性 | 第36页 |
| 1．2．2．7 病毒弱毒株完整基因介导的抗病性 | 第36-37页 |
| 1．2．2．8 缺陷干扰分子介导的抗病性 | 第37页 |
| 1．2．2．9 RNA介导的抗病性 | 第37-40页 |
| 1．2．3 展望 | 第40页 |
| 1．3 本研究的立题论据 | 第40-41页 |
| 2． 研究报告 | 第41-88页 |
| 第一章 马铃薯Y病毒衣壳蛋白基因片段长度对RNA介导抗病性的影响 | 第41-70页 |
| 2．1 材料与方法 | 第41-55页 |
| 2．1．1 材料 | 第41-42页 |
| 2．1．2 方法 | 第42-55页 |
| 2．1．2．1 目的片段的获得 | 第42-43页 |
| 2．1．2．2 克隆（表达）载体DNA的制备 | 第43-46页 |
| 2．1．2．3 目的片段与克隆（表达）载体的连接 | 第46页 |
| 2．1．2．4 质粒DNA向大肠杆菌中的转化 | 第46-47页 |
| 2．1．2．5 转化菌落的鉴定 | 第47页 |
| 2．1．2．6 序列测定 | 第47页 |
| 2．1．2．7 植物表达载体的构建 | 第47页 |
| 2．1．2．8 重组植物表达载体向农杆菌中转化（冻融法) | 第47-48页 |
| 2．1．2．9 农杆菌介导的外源基因向烟草中转化及转化植株的获得 | 第48页 |
| 2．1．2．10 转化植株的卡那霉素抗性筛选鉴定及扩繁 | 第48页 |
| 2．1．2．11 转化植株的DNA提取及PCR检测 | 第48-49页 |
| 2．1．2．12 转基因植株的抗病性鉴定及ELISA检测 | 第49-50页 |
| 2．1．2．13 转基因植株的Southern blot分析 | 第50-52页 |
| 2．1．2．14 转基因植株的总RNA的提取及Northern blot分析 | 第52-55页 |
| 2．2 结果与分析 | 第55-70页 |
| 2．2．1 PVYN-CP3′端部分基因片段的克隆 | 第55-59页 |
| 2．2．1．1 PVYN-CP3′端部分基因片段的PCR扩增 | 第55页 |
| 2．2．1．2 质粒DNA的酶切?脱磷 | 第55-56页 |
| 2．2．1．3 PCR扩增产物与克隆载体的连接及重组质粒的鉴定 | 第56-58页 |
| 2．2．1．4 基因序列测定 | 第58-59页 |
| 2．2．2 植物表达载体的构建 | 第59-60页 |
| 2．2．3 转化植株的获得 | 第60页 |
| 2．2．4 转化植株的PCR及CP蛋白检测 | 第60-62页 |
| 2．2．4．1 烟草总DNA的提取 | 第61页 |
| 2．2．4．2 转基因植株的PCR及CP蛋白检测 | 第61-62页 |
| 2．2．5 转基因植株的抗病性分析 | 第62-66页 |
| 2．2．6 转基因烟草的Southern blot分析 | 第66-69页 |
| 2．2．6．1 转基因（非转基因）烟草DNA的酶切 | 第66页 |
| 2．2．6．2 转基因烟草的Southern blot分析 | 第66-69页 |
| 2．2．7 转基因烟草的Northern blot分析 | 第69-70页 |
| 第二章 马铃薯Y病毒衣壳蛋白基因片段结构对RNA介导抗病性的影响 | 第70-88页 |
| 2．3 材料与方法 | 第70-75页 |
| 2．3．1 材料 | 第70页 |
| 2．3．2 方法 | 第70-75页 |
| 2．3．2．1 PVYN-CP5′端反向重复结构和正向重复结构的构建 | 第70-73页 |
| 2．3．2．2 克隆（表达）载体DNA的制备 | 第73页 |
| 2．3．2．3 目的片段与克隆（表达）载体的连接 | 第73页 |
| 2．3．2．4 质粒DNA向大肠杆菌中的转化 | 第73页 |
| 2．3．2．5 转化菌落的鉴定 | 第73页 |
| 2．3．2．6 序列测定 | 第73-74页 |
| 2．3．2．7 植物表达载体的构建 | 第74页 |
| 2．3．2．8 重组表达载体向农杆菌中转化（冻融法) | 第74页 |
| 2．3．2．9 农杆菌介导的外源基因向烟草中转化及转化植株的获得 | 第74页 |
| 2．3．2．10 转化植株的卡那霉素抗性筛选鉴定及扩繁 | 第74页 |
| 2．3．2．11 转化植株的DNA提取及PCR检测 | 第74页 |
| 2．3．2．12 转基因烟草的抗病性鉴定及ELISA检测 | 第74页 |
| 2．3．2．13 转基因烟草的Southern blot分析 | 第74页 |
| 2．3．2．14 转基因烟草总RNA的提取及Northern blot分析 | 第74-75页 |
| 2．4 结果与分析 | 第75-88页 |
| 2．4．1 PVYN-CP5′端反向重复结构和正向重复结构的构建 | 第75-80页 |
| 2．4．1．1 PVYN-CP5′端部分片段的PCR扩增 | 第75页 |
| 2．4．1．2 PVYN-CP5′端反向重复结构和正向重复结构的构建 | 第75-77页 |
| 2．4．1．3 PVYN-CP5′端IR和DR基因的克隆 | 第77-79页 |
| 2．4．1．4 基因序列测定 | 第79-80页 |
| 2．4．2 植物表达载体的构建 | 第80-81页 |
| 2．4．3 转化植株的获得 | 第81页 |
| 2．4．4 转化植株的PCR检测 | 第81-83页 |
| 2．4．4．1 烟草总DNA的提取 | 第81-82页 |
| 2．4．4．2 转化植株的PCR检测 | 第82-83页 |
| 2．4．5 转基因烟草的抗病性分析 | 第83-85页 |
| 2．4．6 转基因烟草的Southern blot分析 | 第85-87页 |
| 2．4．6．1 转基因（非转基因）烟草DNA的酶切 | 第85-86页 |
| 2．4．6．2 转基因烟草的Southern blot分析 | 第86-87页 |
| 2．4．7 转基因烟草的Northern blot分析 | 第87-88页 |
| 3． 讨论 | 第88-92页 |
| 3．1 马铃薯Y病毒衣壳蛋白基因片段长度对RNA介导抗性病的影响 | 第88-90页 |
| 3．2 马铃薯Y病毒衣壳蛋白基因片段结构对RNA介导抗性病的影响 | 第90-92页 |
| 4． 结论 | 第92-93页 |
| 4．1 马铃薯Y病毒衣壳蛋白基因片段长度对RNA介导抗病性的影响 | 第92页 |
| 4．2 马铃薯Y病毒衣壳蛋白基因片段结构对RNA介导抗病性的影响 | 第92-93页 |
| 5． 参考文献 | 第93-107页 |
| 6． 附录 | 第107-121页 |
| 6．1 附录A:常用溶液、试剂、培养基的配制及仪器 | 第107-114页 |
| 6．2 附录B:本文所用载体图谱 | 第114-116页 |
| 6．3 附录C:植物表达载体构建策略 | 第116-118页 |
| 6．4 附录D:转基因烟草的获得 | 第118-121页 |
| 7． 致谢 | 第121-122页 |
| 8． 攻读学位期间发表论文情况 | 第122页 |
