| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-21页 |
| ·BVDV 的生物学特性 | 第10-11页 |
| ·BVDV 形态及理化学特性 | 第10页 |
| ·BVDV 的分型 | 第10-11页 |
| ·分子生物学特征 | 第11-12页 |
| ·BVDV 蛋白结构的研究 | 第12-16页 |
| ·结构蛋白 | 第12-14页 |
| ·非结构蛋白 | 第14-16页 |
| ·BVDV 发生机理 | 第16-18页 |
| ·急性型BVDV | 第16页 |
| ·粘膜病 | 第16-17页 |
| ·持续性感染与免疫耐受 | 第17页 |
| ·繁殖障碍 | 第17-18页 |
| ·血小板减少症和出血综合征 | 第18页 |
| ·BVDV 诊断技术研究进展 | 第18-19页 |
| ·血清中和试验 | 第19页 |
| ·琼脂扩散实验 | 第19页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第19页 |
| ·本研究目的及意义 | 第19-21页 |
| 2 材料 | 第21-24页 |
| ·毒株、病料 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·试验所需主要溶液及其配制 | 第23-24页 |
| ·RNA 提取所用溶液 | 第23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第23页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化所用试剂 | 第23-24页 |
| 3 试验方法 | 第24-35页 |
| ·病毒培养及细胞毒浓缩 | 第24页 |
| ·细胞培养 | 第24页 |
| ·病毒的接种 | 第24页 |
| ·BVDV 的毒力测定-- TCID50 的测定 | 第24页 |
| ·引物的设计与合成 | 第24-25页 |
| ·BVDV 总RNA 的提取 | 第25页 |
| ·反转录合成CDNA | 第25页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第25-26页 |
| ·PCR 扩增产物的凝胶电泳 | 第26页 |
| ·RT-PCR 检测方法验证 | 第26页 |
| ·特异性试验 | 第26页 |
| ·RT-PCR 敏感性试验 | 第26页 |
| ·RT-PCR 重复性试验 | 第26页 |
| ·RT-PCR 应用性检测 | 第26页 |
| ·BVDV 病毒 gP48 基因的克隆 | 第26-28页 |
| ·引物设计与合成 | 第26-27页 |
| ·BVDV 病毒总 RNA 提取 | 第27页 |
| ·BVDV-gP48 片段cDNA 的扩增 | 第27页 |
| ·PCR 扩增BVDV-gP48 基因 | 第27-28页 |
| ·PCR 产物凝胶回收纯化 | 第28页 |
| ·pMD18-T-gP48 克隆载体的构建与鉴定 | 第28-31页 |
| ·目的片段 gP48 与PMD18-T 载体的连接 | 第28-29页 |
| ·感受态细胞E.coli DH5α的制备 | 第29页 |
| ·连接产物转化感受态细胞DH5α | 第29页 |
| ·重组质粒的小量制备 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第30-31页 |
| ·gP48 基因表达载体的构建 | 第31-35页 |
| ·载体的制备 | 第31页 |
| ·gP48 基因表达载体的连接与酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·gP48 基因的诱导表达 | 第32-33页 |
| ·Western blot 检测 | 第33-35页 |
| 4 结果 | 第35-41页 |
| ·病毒的细胞培养 | 第35页 |
| ·分离毒株的毒力测定-- TCID50 的测定 | 第35-36页 |
| ·RT-PCR 方法建立 | 第36-38页 |
| ·RT-PCR 扩增及鉴定 | 第36页 |
| ·RT-PCR 特异性试验 | 第36-37页 |
| ·RT-PCR 敏感性试验 | 第37页 |
| ·RT-PCR 重复性试验 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR 应用性检测 | 第38页 |
| ·gP48 基因的克隆及表达 | 第38-41页 |
| ·gP48 基因的PCR 扩增 | 第38页 |
| ·gP48 基因的克隆载体酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·gP48 -PET32a(+)原核表达载体的酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·融合蛋白 gP48-PET32a(+)的诱导表达 | 第40页 |
| ·gP48-PET32a(+) Western Blot 检测 | 第40-41页 |
| 5 讨论 | 第41-43页 |
| 6 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 在读期间发表论文 | 第49-50页 |
| 附录 | 第50-51页 |
| 作者简介 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
