| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| ·凝集素概述 | 第11-12页 |
| ·命名 | 第11-12页 |
| ·分类 | 第12页 |
| ·galectin-3 | 第12-17页 |
| ·galectin-3 的基因、蛋白结构 | 第13-14页 |
| ·galectin-3 的组织分布与表达 | 第14-15页 |
| ·galectin-3 糖基结合位点分析 | 第15-16页 |
| ·galectin-3 的磷酸化 | 第16-17页 |
| ·galectin-3 与肿瘤 | 第17-20页 |
| ·galectin-3 在肿瘤细胞凋亡中的作用 | 第17-19页 |
| ·细胞内 galectin-3 的抗凋亡作用 | 第17-18页 |
| ·细胞外 galectin-3 的抗凋亡作用 | 第18页 |
| ·细胞外 galectin-3 的促凋亡作用 | 第18-19页 |
| ·galectin-3 在肿瘤细胞转移中的作用 | 第19-20页 |
| ·galectin-3C 的研究进展 | 第20-22页 |
| ·galectin-3 抑制剂 | 第20-21页 |
| ·galectin-3C 的研究进展 | 第21-22页 |
| 第二章 蟾蜍 galectin-3 基因全长 ORF 的克隆、鉴定 | 第22-36页 |
| ·材料 | 第22-25页 |
| ·试验动物 | 第22页 |
| ·大肠埃希菌菌株与 cDNA 质粒文库 | 第22页 |
| ·质粒 | 第22-23页 |
| ·培养基及抗生素 | 第23-24页 |
| ·主要试剂的配制 | 第24页 |
| ·工具酶及其他试剂 | 第24页 |
| ·主要实验仪器 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-30页 |
| ·日本蟾蜍 galectin-3 克隆 | 第25-26页 |
| ·日本蟾蜍皮肤 cDNA 质粒文库转化 | 第25页 |
| ·全长 cDNA 筛选 | 第25页 |
| ·质粒回收 | 第25-26页 |
| ·DNA 限制性内切酶消化 | 第26页 |
| ·DNA 测序 | 第26页 |
| ·中华蟾蜍 galectin-3 克隆 | 第26-30页 |
| ·皮肤总 RNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·总 RNA 提取质量检测 | 第27页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·反转录反应合成第 链 cDNA | 第27-28页 |
| ·目的 cDNA 的扩增与电泳 | 第28页 |
| ·PCR 产物与 T-Vector 的连接 | 第28页 |
| ·大肠埃希菌(E.coli DH5α)感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·连接产物转化 | 第29页 |
| ·菌 PCR | 第29页 |
| ·质粒回收与双酶切鉴定 | 第29页 |
| ·DNA 测序 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-34页 |
| ·日本蟾蜍皮肤 cDNA 质粒文库盲筛结果 | 第30页 |
| ·中华蟾蜍皮肤总 RNA 的提取 | 第30页 |
| ·中华蟾蜍皮肤 galectin-3 PCR 扩增结果 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第31-33页 |
| ·测序结果 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| ·蟾蜍组织的选择 | 第34-35页 |
| ·EcoRⅠ的双酶切 | 第35页 |
| ·ORF 分析 | 第35-36页 |
| 第三章 中华蟾蜍 galectin-3 序列的生物信息学分析 | 第36-55页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·序列来源 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-49页 |
| ·中华蟾蜍 galectin-3 核苷酸多样性分析 | 第37-39页 |
| ·日本蟾蜍 galectin-3 分子多样性分析 | 第39-41页 |
| ·galectin-3 氨基酸位点突变 | 第41-43页 |
| ·galectin-3 编码蛋白一级结构序列分析 | 第43页 |
| ·蛋白质的同源性检索及系统发生进化树分析 | 第43-45页 |
| ·galectin-3 蛋白质的二级结构预测 | 第45-46页 |
| ·galectin-3 蛋白质的立体结构预测 | 第46页 |
| ·galectin-3 蛋白质的功能结构域分析 | 第46-49页 |
| ·保守结构域预测 | 第46-47页 |
| ·酸化位点预测 | 第47页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第47-48页 |
| ·信号肽预测 | 第48-49页 |
| ·跨膜结构分析 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-55页 |
| ·galectin-3 N 末端缺失突变体与 galectin-3 抑制剂开发 | 第49-50页 |
| ·蟾蜍皮肤 galectin-3 序列多态性的真实性 | 第50页 |
| ·蟾蜍皮肤 galectin-3 序列多态性的分子形成机制 | 第50-51页 |
| ·蟾蜍皮肤 galectin-3 序列多态性的生物学适应意义 | 第51页 |
| ·蟾蜍皮肤 galectin-3 分子多样性与中性学说 | 第51-52页 |
| ·蟾蜍皮肤 galectin-3 的结构与功能预测 | 第52-55页 |
| 第四章 中华蟾蜍 galectin-3 基因及其 3 种 galectin-3 C 基因的亚克隆与原核表达载体构建 | 第55-63页 |
| ·材料 | 第55-57页 |
| ·质粒 | 第55-56页 |
| ·大肠埃希菌菌株 | 第56页 |
| ·培养基及抗生素 | 第56页 |
| ·主要试剂的配制 | 第56页 |
| ·工具酶及其他试剂 | 第56页 |
| ·主要实验仪器 | 第56-57页 |
| ·方法 | 第57-60页 |
| ·galectin-3C 序列的设计 | 第57页 |
| ·引物设计 | 第57-58页 |
| ·galectin-3 与 galectin-3C 的亚克隆 | 第58页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第58页 |
| ·双酶切 | 第58-59页 |
| ·酶切产物凝胶回收及纯化 | 第59页 |
| ·表达载体 pET-28b 的制备 | 第59页 |
| ·pET-28b 质粒的提取 | 第59页 |
| ·表达载体线性化 | 第59页 |
| ·表达载体的构建和鉴定 | 第59-60页 |
| ·连接 | 第59-60页 |
| ·转化 | 第60页 |
| ·菌落 PCR 鉴定 | 第60页 |
| ·质粒回收双酶切鉴定 | 第60页 |
| ·序列测定 | 第60页 |
| ·结果与分析 | 第60-62页 |
| ·PCR 纯化结果 | 第60页 |
| ·目的片段与载体酶切后结果 | 第60-61页 |
| ·表达载体的菌落 PCR 鉴定和双酶切鉴定 | 第61-62页 |
| ·DNA 测序 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| ·原核表达载体的选用 | 第62页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第62-63页 |
| 第五章 原核诱导表达条件优化 | 第63-68页 |
| ·材料 | 第63-64页 |
| ·培养基及抗生素 | 第63页 |
| ·大肠埃希菌菌株及其他试剂 | 第63页 |
| ·主要试剂的配制 | 第63-64页 |
| ·主要实验仪器 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-65页 |
| ·重组质粒转化 | 第64页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及其条件优化 | 第64页 |
| ·SDS-PAGE 电泳及染色 | 第64-65页 |
| ·结果与分析 | 第65-67页 |
| ·重组质粒在大肠埃希菌中的表达 | 第65页 |
| ·诱导时间对重组质粒表达的影响 | 第65-67页 |
| ·讨论 | 第67-68页 |
| 第六章 结论与展望 | 第68-70页 |
| ·结论 | 第68页 |
| ·展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 附录 | 第79-90页 |
| 附录一：缩写词英汉对照 | 第79-82页 |
| 附录二：ORF Finder 分析结果 | 第82-90页 |
| 作者简介 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
