摘要 | 第1-9页 |
Abstract | 第9-10页 |
第一章 前言 | 第10-15页 |
·羊毛甾醇14α-去甲基化酶(P45014DM)与白念珠菌耐药机理 | 第10页 |
·基于免疫原性肽的多克隆抗体 | 第10-11页 |
·表达载体的选择 | 第11-12页 |
·白念珠菌CYP51 免疫原性肽多克隆抗血清的制备与鉴定流程 | 第12-13页 |
·讨论与小结 | 第13-15页 |
第二章 CYP51 免疫原性肽的设计 | 第15-17页 |
·免疫原性肽设计简介 | 第15页 |
·生物信息学在蛋白质分析中的运用 | 第15-16页 |
·CYP51 蛋白的生物信息学分析 | 第16页 |
·CYP51 蛋白疏水性的分析 | 第16页 |
·CYP51 蛋白免疫原性的分析 | 第16页 |
·CYP51 免疫原性肽的设计 | 第16-17页 |
第三章 CYP51 蛋白抗原决定簇(免疫原性肽)基因重组表达质粒的构建与表达 | 第17-28页 |
·材料 | 第17-18页 |
·主要试剂 | 第17页 |
·菌株和质粒 | 第17页 |
·引物合成 | 第17页 |
·基因组来源 | 第17页 |
·溶液配制 | 第17-18页 |
·培养基 | 第18页 |
·主要仪器 | 第18页 |
·方法 | 第18-24页 |
·白念珠菌SC5314 基因组的提取 | 第18页 |
·引物设计 | 第18-19页 |
·目的基因的获得 | 第19页 |
·目的基因的克隆和阳性重组子的筛选 | 第19-22页 |
·表达质粒的构建与鉴定 | 第22-24页 |
·目的基因的诱导表达 | 第24页 |
·表达产物的SDS 蛋白电泳分析 | 第24页 |
·结果 | 第24-27页 |
·CYP51A1 cDNA片段的扩增 | 第24-25页 |
·克隆载体的构建与鉴定 | 第25页 |
·表达载体的构建与鉴定 | 第25页 |
·基因的表达及表达蛋白的初步鉴定 | 第25-27页 |
·讨论与小结 | 第27-28页 |
第四章 目的蛋白表达条件的优化、纯化及初步鉴定 | 第28-38页 |
·材料 | 第28-29页 |
·试剂 | 第28页 |
·溶液配制 | 第28-29页 |
·主要仪器 | 第29页 |
·方法 | 第29-32页 |
·目的蛋白表达条件的优化 | 第29-30页 |
·包涵体的纯化 | 第30-31页 |
·纯化产物的Western blot鉴定 | 第31-32页 |
·结果 | 第32-36页 |
·表达条件的优化 | 第32-33页 |
·包涵体的纯化 | 第33-34页 |
·纯化产物的Western blot鉴定 | 第34-36页 |
·讨论与小结 | 第36-38页 |
第五章 兔抗CYP51 多克隆抗体的制备 | 第38-42页 |
·材料 | 第38页 |
·试剂 | 第38页 |
·溶液配制 | 第38页 |
·主要仪器 | 第38页 |
·方法 | 第38-39页 |
·抗原的乳化 | 第38页 |
·家兔免疫 | 第38页 |
·抗体效价测定(ELISA 法.) | 第38-39页 |
·抗体特异性检测(Western Blot 免疫印迹.) | 第39页 |
·结果 | 第39-41页 |
·讨论与小结 | 第41-42页 |
参考文献 | 第42-43页 |
(综述 )对RNA干扰机制探索的回顾及其在酵母研究中的进展 | 第43-51页 |
参考文献 | 第49-51页 |
致谢 | 第51页 |