| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 综述BR信号转导通路研究进展 | 第9-22页 |
| ·BR信号转导通路上游组分的发现及其功能研究 | 第10-13页 |
| ·BR受体-BRI1的发现和功能 | 第10-11页 |
| ·BRI1的负调控因子BKI1的发现和功能 | 第11页 |
| ·BR的共受体-BAK1 | 第11-12页 |
| ·细胞质类受体激酶家族成员BSKs和CDG1调控的BR信号的传递 | 第12-13页 |
| ·BR信号通路的下游组分的发现及其功能研究 | 第13-18页 |
| ·BIN2:负调控BR信号通路的重要蛋白激酶 | 第13-14页 |
| ·BES1和BZR1:调控BR诱导基因的关键转录因子 | 第14-16页 |
| ·BR信号通路中的14-3-3蛋白 | 第16页 |
| ·BR信号通路中的其它转录因子 | 第16-17页 |
| ·BR诱导基因的调控网络及其调控植物发育的机制 | 第17-18页 |
| ·BR信号通路组分磷酸化与脱磷酸化的调控机制 | 第18-20页 |
| ·磷酸酶BSU1 | 第18页 |
| ·磷酸酶PP2A | 第18-19页 |
| ·BR信号通路中的酪氨酸磷酸化 | 第19-20页 |
| ·BR信号通路和其它信号通路的互作 | 第20页 |
| ·BR信号转导通路模型 | 第20-21页 |
| ·BR信号通路研究的主要生物学问题 | 第21-22页 |
| 第二章 实验材料和实验方法 | 第22-35页 |
| ·实验材料 | 第22-25页 |
| ·植物材料和培养条件 | 第22页 |
| ·菌株 | 第22页 |
| ·酶 | 第22页 |
| ·抗体 | 第22-23页 |
| ·载体 | 第23页 |
| ·抗生素 | 第23页 |
| ·蛋白纯化介质 | 第23-24页 |
| ·试剂盒 | 第24页 |
| ·主要的化学试剂 | 第24-25页 |
| ·主要的实验仪器 | 第25页 |
| ·图像及数据分析软件 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-35页 |
| ·载体的构建 | 第25-26页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察蛋白的亚细胞定位 | 第26页 |
| ·融合蛋白休外表达及纯化 | 第26-27页 |
| ·体外pull-down实验 | 第27页 |
| ·半体内pull-down实验 | 第27-28页 |
| ·免疫共沉淀实验(Co-IP) | 第28页 |
| ·免疫印迹分析蛋白表达 | 第28-29页 |
| ·酵母双杂交实验 | 第29页 |
| ·基因表达谱分析 | 第29-30页 |
| ·放射自显影实验检测BKI1的底物磷酸化 | 第30页 |
| ·荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测基因表达 | 第30-31页 |
| ·点突变载体的构建 | 第31页 |
| ·质谱分析BKI1磷酸化位点 | 第31-32页 |
| ·细胞质和细胞核组分分离实验 | 第32页 |
| ·细胞膜和细胞质组分分离实验 | 第32页 |
| ·质谱分析BKI1互作蛋白 | 第32-33页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥的转化 | 第33页 |
| ·植物材料的种植 | 第33页 |
| ·植物材料的激素处理 | 第33-34页 |
| ·BKI1体内磷酸化的检测 | 第34页 |
| ·烟草叶片细胞瞬时转化实验 | 第34-35页 |
| 第三章 BKI1从细胞膜解离的机制研究 | 第35-53页 |
| ·BKI1的氮末端和碳末端的功能 | 第35-43页 |
| ·BKI1的N末端负责BKI1的膜定位 | 第35-36页 |
| ·BKI1的C末端负责BKI1的调控功能 | 第36-42页 |
| ·细胞质定位的BKI1-C促进了BR信号的输出 | 第42-43页 |
| ·BKI1的磷酸化位点S270和S274对BKI1从细胞膜上解离到细胞质起着重要作用 | 第43-51页 |
| ·BKI1在植物体内被磷酸化 | 第43-44页 |
| ·BKI1的磷酸化位点S270和S274对BKI1从细胞膜的解离很重要 | 第44-48页 |
| ·细胞膜定位的BKI1抑制BR信号的输出 | 第48-50页 |
| ·BKI1的S270A和S274A突变导致其被BRI1磷酸化的程度显著降低 | 第50-51页 |
| ·结论 | 第51-53页 |
| 第四章 14-3-3蛋白与磷酸化的BKI1互作的机制研究 | 第53-68页 |
| ·磷酸化的BKI1和14-3-3蛋白相互作用 | 第53-60页 |
| ·BKI1和14-3-3蛋白的相互作用 | 第53-56页 |
| ·eBL处理促进BKI1与14-3-3蛋白的相互作用 | 第56-57页 |
| ·BKI1的S270/274位点介导了BKI1与14-3-3κ的相互作用 | 第57-59页 |
| ·S270和S274突变为天冬氨酸不能够模拟BKI1的磷酸化 | 第59-60页 |
| ·过表达14-3-3K促进BKI1从细胞膜上的解离 | 第60-66页 |
| ·eBL处理促进14-3-3κ与磷酸化BES1的解离 | 第60-61页 |
| ·14-3-3κ的基因表达模式与BKI1相似 | 第61-62页 |
| ·14-3-3κ负调控BR信号的输出 | 第62页 |
| ·过量表达14-3-3κ可以释放过表达BKI1对植株生长的抑制作用 | 第62-64页 |
| ·14-3-3蛋白帮助磷酸化的BKI1从细胞膜解离到细胞质中 | 第64-66页 |
| ·结论 | 第66-68页 |
| 第五章 BKI1作为双重功能蛋白介导一条新的BR信号转导通路 | 第68-76页 |
| ·BKI1有正调控功能 | 第68-72页 |
| ·低表达量BKI1植株的筛选 | 第68-69页 |
| ·低表达量BKI1有正调控植物生长的作用 | 第69-70页 |
| ·磷酸化的BKI1抑制14-3-3蛋白与BES1的相互作用 | 第70-72页 |
| ·BKI1-C与14-3-3K互作 | 第72-74页 |
| ·BKI1-C在体内与14-3-3κ互作 | 第72-73页 |
| ·过量表达BKI1-C使更多的BES1处于非磷酸化状态 | 第73页 |
| ·BKI1-C可以被BRI1蛋白激酶磷酸化 | 第73-74页 |
| ·本章讨论 | 第74-76页 |
| ·BKI1上被BRI1磷酸化的区域和与BRI1互作的区域是独立的 | 第74-75页 |
| ·BKI1解离后的功能 | 第75-76页 |
| 第六章 BKI1的丝氨酸磷酸化和酪氨酸磷酸化位点对其从细胞膜解离的贡献研究 | 第76-82页 |
| ·酪氨酸磷酸化位点Y211的突变不影响BKI1和14-3-3的互作 | 第76-78页 |
| ·BKI1中S270/274的突变影响了BKI1~(Y211D)的定位 | 第78-79页 |
| ·S270、S274和Y211同时突变对植株大小的影响 | 第79-80页 |
| ·讨论 | 第80-82页 |
| 第七章 结论和展望 | 第82-85页 |
| ·结论 | 第82-83页 |
| ·展望 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-95页 |
| 附录 | 第95-106页 |
| 附录A 本论文中用到的引物 | 第95-99页 |
| 附录B 常用试剂和缓冲液配方 | 第99-104页 |
| 附录C 常用培养基配方 | 第104-106页 |
| 在读期间发表论文 | 第106-107页 |
| 在读期间翻译著作 | 第107页 |
| 在读期间所获奖励 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
