| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 引言 | 第8-19页 |
| ·国内外畜禽遗传资源现状 | 第8页 |
| ·畜禽种质资源的利用 | 第8-9页 |
| ·转基因技术 | 第9-15页 |
| ·转基因方法概述 | 第10-12页 |
| ·利用转基因技术对我国地方鸡种优良性状的改良 | 第12-14页 |
| ·荧光蛋白在转基因技术中的应用 | 第14-15页 |
| ·动物细胞培养技术 | 第15-18页 |
| ·体外培养细胞的方法及过程 | 第15-16页 |
| ·体外细胞的原代和继代培养 | 第16页 |
| ·培养细胞的冻存与复苏 | 第16页 |
| ·细胞系的检测 | 第16-17页 |
| ·细胞培养的应用 | 第17-18页 |
| ·部分重要性状基因克隆保存的价值及意义 | 第18-19页 |
| 2 实验一北京油鸡部分重要性状基因克隆 | 第19-30页 |
| ·材料与方法 | 第19-26页 |
| ·材料 | 第19-23页 |
| ·实验方法 | 第23-26页 |
| ·实验结果 | 第26-29页 |
| ·不同组织总 RNA 提取 | 第26页 |
| ·RT-RCR | 第26-27页 |
| ·PURH 基因在不同组织中的分布 | 第27页 |
| ·序列提交 Genbank | 第27-29页 |
| ·讨论 | 第29-30页 |
| ·全长 PURH 基因cDNA 序列及其编码氨基酸序列分析 | 第29页 |
| ·北京油鸡 PURH 基因cDNA 全序列 SNP 多态性分析 | 第29-30页 |
| 3 实验二北京油鸡成纤维靶细胞系构建及检测 | 第30-38页 |
| ·实验方法 | 第30-33页 |
| ·细胞培养 | 第30-31页 |
| ·细胞检测 | 第31-33页 |
| ·结果 | 第33-37页 |
| ·细胞培养 | 第33-34页 |
| ·细胞检测结果 | 第34-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| 4 实验三北京油鸡PURH 基因的表达载体构建 | 第38-47页 |
| ·实验方法 | 第38-40页 |
| ·北京油鸡 PURH 真核表达载体的构建 | 第38页 |
| ·脂质体介导法转染成纤维细胞及 PURH 基因的亚细胞分布. | 第38-39页 |
| ·G418 北京油鸡成纤维细胞最小致死量测定与抗性细胞的筛选 | 第39页 |
| ·单克隆阳性细胞株荧光蛋白基因整合、表达的检测及鉴定 | 第39页 |
| ·PURH 在北京油鸡成纤维细胞中表达检测 | 第39-40页 |
| ·结果 | 第40-44页 |
| ·PURH 真核表达载体的构建 | 第40页 |
| ·pEGFP-N3-PURH 转染条件的优化 | 第40-41页 |
| ·重组外源基因转染率的比较 | 第41-42页 |
| ·北京油鸡 PURH 基因的亚细胞定位 | 第42-43页 |
| ·克隆化细胞株的筛选 | 第43-44页 |
| ·阳性细胞株的鉴定 | 第44页 |
| ·Western blot 检测在北京油鸡成纤维细胞中表达的重组融合蛋白 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-47页 |
| ·影响pEGFP-N3－PURH 转染表达的各种因素 | 第44-45页 |
| ·PURH 在细胞中的定位 | 第45页 |
| ·北京油鸡成纤维细胞pEGFP-N3，pEYFP-N1 及pDsRed1-N1 阳性细胞株的建立 | 第45-46页 |
| ·北京油鸡成纤维细胞中表达的重组融合蛋白检测 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 附录 | 第52-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
