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过量表达Lsil增强水稻抗UV-B辐射机制的初步研究

中文摘要第1-8页
Abstract第8-10页
1 引言第10-20页
   ·水稻对UV-B 辐射响应的研究进展第10-13页
     ·UV-B 辐射增强对水稻植株形态及细胞系统的影响第11页
     ·水稻对UV-B 辐射增强的适应机制第11-12页
     ·水稻对UV-B 辐射增强的抗性遗传特性第12-13页
   ·水稻硅营养研究进展第13-15页
   ·水稻硅营养及其抗UV-B第15页
   ·水稻Low silicon rice 基因的研究第15-18页
   ·基因过量表达的研究第18-19页
   ·本研究的内容与特点第19-20页
2 材料与方法第20-30页
   ·材料第20页
     ·供试材料第20页
     ·实验试剂第20页
   ·方法第20-30页
     ·供式材料的种植第20页
     ·Lsi1 全长ORF 的克隆第20-26页
       ·总RNA 提取第20-21页
       ·痕量基因组DNA 的DNase 处理第21页
       ·RNA 纯度和完整性的检测第21-22页
       ·cDNA 第一链的合成第22页
       ·Lsi1 基因的克隆第22-23页
       ·胶回收试剂盒回收目的片段(操作见试剂盒说明书)第23页
       ·目的片段连接到pMD18-T Vector第23页
       ·DH5α感受态细胞的制备方法第23-24页
       ·将连接好的产物转化到大肠杆菌DH5α的感受态细胞中第24页
       ·重组子的鉴定第24-26页
     ·Lsi1-ubiquitin1301 过量表达载体的构建第26-27页
     ·Lsi1-ubiquitin1301 过量表达转基因植株的获得第27-28页
       ·根癌农杆菌EHA105 感受态细胞的制备第27页
       ·液氮速冻法将重组质粒Lsi1-ubiquitin1301 转化感受态根癌农杆菌EHA105第27页
       ·水稻转基因第27-28页
     ·阳性Lsi1-ubiquitin1301 过量表达转基因植株的筛选第28页
       ·GUS 染色第28页
       ·半定量RT-PCR 检测Lsi1 基因的表达量第28页
     ·转基因水稻UV-B 处理第28-29页
     ·半定量 RT-PCR 检测转基因水稻及其野生型苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因与光复活酶(Photolyase)基因的表达量第29页
     ·总酚测量第29页
     ·总黄酮测量第29-30页
3 结果与分析第30-37页
   ·Lsi1 全长ORF 的克隆第30-31页
   ·Lsi1-ubiquitin1301 过量表达载体的构建第31-32页
   ·Lsi1 基因过量表达转基因植株的获得第32-37页
     ·Lsi1-Ubiquitin-1301 的遗传转化第32-33页
     ·转基因植株的GUS 染色结果第33页
     ·转基因水稻及野生型水稻根系Lsi1 基因表达量第33-34页
     ·UV-B 辐射后,Lsi1 基因过量表达水稻与野生型水稻苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因及光复活酶(Photolyase)基因的表达变化第34-35页
     ·总酚含量测定结果第35-36页
     ·总黄酮含量测定结果第36-37页
4 结论与讨论第37-40页
5 问题与展望第40-41页
   ·本研究的不足之处第40页
   ·进一步研究的设想第40-41页
6 参考文献第41-49页
致谢第49页

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