| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-19页 |
| ·半滑舌鳎简介 | 第8-9页 |
| ·半滑舌鳎的形态和分布 | 第8页 |
| ·经济价值 | 第8页 |
| ·半滑舌鳎的病害 | 第8-9页 |
| ·鱼类的免疫系统 | 第9-10页 |
| ·硫氧还蛋白 | 第10-17页 |
| ·硫氧还蛋白的发现 | 第10页 |
| ·硫氧还蛋白的分类和结构 | 第10-12页 |
| ·硫氧还蛋白的生物学功能 | 第12-15页 |
| ·抗氧化作用 | 第13页 |
| ·生长因子作用 | 第13-14页 |
| ·抑制凋亡作用 | 第14页 |
| ·维持内稳态 | 第14页 |
| ·转录调节作用 | 第14-15页 |
| ·硫氧还蛋白的氧化还原机制 | 第15-16页 |
| ·硫氧还蛋白的应用 | 第16-17页 |
| ·本文研究目的、意义 | 第17-19页 |
| 第二章 CsTrx1全长cDNA序列克隆及生物信息学分析 | 第19-24页 |
| ·材料和方法 | 第19-20页 |
| ·实验材料 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第20页 |
| ·半滑舌鳎cDNA文库的筛选与CsTrx1基因序列的克隆 | 第20页 |
| ·序列分析 | 第20页 |
| ·结果与讨论 | 第20-24页 |
| ·CsTrx1的序列分析 | 第21页 |
| ·CsTrx1的同源性比对和活性位点分析 | 第21-23页 |
| ·CsTrx1蛋白同源物种的进化树分析 | 第23-24页 |
| 第三章 rCsTrx1的表达纯化和活性分析 | 第24-35页 |
| ·材料和方法 | 第24-32页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·CsTrx1基因的克隆及突变体CsTrx1M的构建 | 第24-28页 |
| ·CsTrx1和突变体CsTrx1M开放阅读框的克隆 | 第24-27页 |
| ·克隆载体的构建 | 第27页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·感受态细胞转化效率的测定 | 第28页 |
| ·转化——将连接产物转化进大肠杆菌DH5α感受态细胞中 | 第28页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第28页 |
| ·CsTrx1和CsTrx1M表达载体的构建 | 第28-30页 |
| ·质粒提取 | 第28-29页 |
| ·酶切 | 第29页 |
| ·pET259载体与插入片段连接 | 第29-30页 |
| ·表达菌株的构建 | 第30页 |
| ·CsTrx1和CsTrx1M在大肠杆菌中的表达 | 第30-32页 |
| ·CsTrx1和CsTrx1M的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·CsTrx1和CsTrx1M重组蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| ·rCsTrx1和rCsTrx1M的二硫键还原酶活性检测 | 第32页 |
| ·结果和讨论 | 第32-35页 |
| ·CsTrx1和CsTrx1M的克隆 | 第32-33页 |
| ·rCsTrx1和rCsTrx1M的纯化 | 第33页 |
| ·rCsTrx1和rCsTrx1M的活性检测和分析 | 第33-35页 |
| 第四章 CsTrx1的功能研究 | 第35-50页 |
| ·材料和方法 | 第35-43页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·实时荧光定量PCR分析CsTrx1在半滑舌鳎组织中的表达情况 | 第36-38页 |
| ·解剖获取半滑舌鳎的组织 | 第36页 |
| ·mRNA的提取 | 第36-37页 |
| ·mRNA反转录为cDNA | 第37页 |
| ·实时荧光定量PCR检测CsTrx1基因在组织中的表达情况 | 第37-38页 |
| ·病原菌刺激对半滑舌鳎CsTrx1表达水平的影响 | 第38-39页 |
| ·鳗弧菌V.anguillarum C312对半滑舌鳎进行刺激 | 第38-39页 |
| ·mRNA的提取及反转录 | 第39页 |
| ·病原菌刺激不同时间后CsTrx1半滑舌鳎肝脾肾中表达量的变化 | 第39页 |
| ·金属离子和H_2O_2刺激半滑舌鳎肝细胞CsTrx1表达水平的影响 | 第39-40页 |
| ·半滑舌鳎肝细胞的提取 | 第39页 |
| ·FeCl_2,CuSO_4和H_2O_2刺激半滑舌鳎肝细胞 | 第39-40页 |
| ·mRNA的提取及反转录 | 第40页 |
| ·金属离子和H_2O_2刺激半滑舌鳎肝细胞CsTrx1不同时间表达量的变化 | 第40页 |
| ·rCsTrx1抵御氧化损伤的保护作用 | 第40-41页 |
| ·半滑舌鳎头肾白细胞的提取 | 第40页 |
| ·rCsTrx1在抵御H_2O_2对半滑舌鳎头肾白细胞氧化损伤的影响 | 第40-41页 |
| ·rCsTrx1刺激细胞增殖的影响 | 第41页 |
| ·半滑舌鳎头肾白细胞的提取 | 第41页 |
| ·rCsTrx1对半滑舌鳎头肾白细胞增殖的影响 | 第41页 |
| ·rCsTrx1对免疫相关基因表达的影响 | 第41-42页 |
| ·半滑舌鳎头肾白细胞的提取 | 第41页 |
| ·rCsTrx1刺激半滑舌鳎头肾白细胞 | 第41-42页 |
| ·mRNA的提取及反转录 | 第42页 |
| ·rCsTrx1对半滑舌鳎头肾白细胞免疫相关基因表达的影响 | 第42页 |
| ·rCsTrx1增强免疫细胞抵御病原菌侵染的影响 | 第42-43页 |
| ·半滑舌鳎头肾白细胞的提取 | 第42页 |
| ·rCsTrx1增强免疫细胞抵御病原菌侵染的影响 | 第42-43页 |
| ·结果和讨论 | 第43-50页 |
| ·正常生理条件下CsTrx1在半滑舌鳎中的组织特异性表达 | 第43页 |
| ·病原菌刺激不同时间后CsTrx1在半滑舌鳎组织中的表达 | 第43-45页 |
| ·rCsTrx1对金属离子和H_2O_2氧化损伤的应答反应 | 第45-46页 |
| ·rCsTrx1在抵御H_2O_2对半滑舌鳎头肾白细胞氧化损伤中的作用 | 第46页 |
| ·rCsTrx1对半滑舌鳎头肾白细胞的增殖作用 | 第46-47页 |
| ·rCsTrx1对半滑舌鳎头肾白细胞免疫相关基因表达的调控 | 第47-48页 |
| ·rCsTrx1增强半滑舌鳎免疫细胞抵御病原菌的侵染 | 第48-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 硕士期间发表的文章 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
