| 摘要 | 第1-20页 |
| ABSTRACT | 第20-24页 |
| 符号说明 | 第24-25页 |
| 第一章 绪论 | 第25-38页 |
| 1 胸腺五肽(thymopentin,TP5)的研究概述 | 第25-28页 |
| ·TP5的发现 | 第25页 |
| ·TP5的分子结构与性质 | 第25-26页 |
| ·TP5的生物学功能 | 第26-27页 |
| ·对胸腺的调节作用 | 第26页 |
| ·对机体免疫功能的调节作用 | 第26-27页 |
| ·对自身免疫性疾病的调节作用 | 第27页 |
| ·抗衰老作用 | 第27页 |
| ·TP5的代谢特点 | 第27-28页 |
| ·TP5的临床应用 | 第28页 |
| 2 胸腺素α1(thymosin α1,Tα1)的研究概述 | 第28-31页 |
| ·Tα1的分布 | 第28页 |
| ·Tα1的结构 | 第28-29页 |
| ·Tα1的生物学功能 | 第29-31页 |
| ·抗肿瘤作用 | 第30页 |
| ·拮抗凋亡作用 | 第30-31页 |
| ·免疫调节作用 | 第31页 |
| ·其它作用 | 第31页 |
| 3 多肽类药物稳定性的研究 | 第31-36页 |
| ·影响多肽类药物稳定性的因素 | 第32-33页 |
| ·蛋白酶水解 | 第32页 |
| ·化学变化 | 第32页 |
| ·物理变化 | 第32-33页 |
| ·多肽类药物稳定性的研究 | 第33-36页 |
| ·化学修饰 | 第33-35页 |
| ·基因工程改变 | 第35页 |
| ·形成环肽 | 第35-36页 |
| 4 立题依据和研究目的 | 第36-38页 |
| 第二章 Tα1-TP5融合肽在毕赤酵母中的分泌表达 | 第38-60页 |
| 1 材料 | 第38-41页 |
| ·质粒及菌株 | 第38页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第38-39页 |
| ·主要溶液及试剂 | 第39-41页 |
| ·大肠杆菌培养基 | 第39-40页 |
| ·毕赤酵母培养基 | 第40页 |
| ·提取质粒DNA所用的缓冲液 | 第40页 |
| ·电泳缓冲液 | 第40页 |
| ·Folin法测定蛋白质含量所需要的溶液 | 第40-41页 |
| ·分离与纯化缓冲液 | 第41页 |
| ·主要仪器设备 | 第41页 |
| 2 方法 | 第41-51页 |
| ·表达载体pGAPZαA-Tα1-TP5构建 | 第41-45页 |
| ·目的基因的克隆 | 第41-44页 |
| ·质粒DNA的提取、纯化与酶切 | 第44-45页 |
| ·目的基因Tα1-TP5与载体的连接 | 第45页 |
| ·阳性重组子的筛选、制备与纯化 | 第45-48页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第45-46页 |
| ·重组质粒的转化 | 第46页 |
| ·阳性重组子的筛选鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组载体DNA的大量制备和纯化 | 第47-48页 |
| ·毕赤酵母的转化与筛选 | 第48-51页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第48-49页 |
| ·重组载体pGAPZαA-Tα1-TP5的线性化 | 第49页 |
| ·表达载体的电转化 | 第49-50页 |
| ·阳性菌落的筛选与鉴定 | 第50-51页 |
| 3 结果 | 第51-56页 |
| ·表达载体的构建 | 第51-52页 |
| ·目的基因的扩增 | 第51页 |
| ·质粒pGAPZαA的线性化 | 第51-52页 |
| ·表达载体pGAPZαA-Tα1-TP5的鉴定 | 第52-53页 |
| ·表达载体pGAPZαA-Tα1-TP5的酶切鉴定 | 第52-53页 |
| ·表达载体pGAPZαA-Tα1-TP5的PCR扩增鉴定 | 第53页 |
| ·表达载体pGAPZαA-Tα1-TP5的DNA测序鉴定 | 第53页 |
| ·阳性菌落的筛选 | 第53-56页 |
| ·阳性菌落的Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定 | 第53-56页 |
| ·酵母阳性重组染色体DNA特异性PCR鉴定 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| ·毕赤酵母与载体的选择 | 第56-57页 |
| ·毕赤酵母的转化与酵母DNA的快速分离 | 第57-58页 |
| ·毕赤酵母的高拷贝量的筛选 | 第58页 |
| ·融合肽Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳 | 第58-59页 |
| 5 小结 | 第59-60页 |
| 第三章 Tα1-TP5融合肽的分离纯化 | 第60-69页 |
| 1 材料 | 第60页 |
| ·试剂及溶液 | 第60页 |
| ·主要仪器设备 | 第60页 |
| 2 方法 | 第60-62页 |
| ·Tα1-TP5融合肽的表达 | 第60-61页 |
| ·融合肽的含量测定 | 第61页 |
| ·Tα1-TP5的分离与纯化 | 第61-62页 |
| ·亲和洗脱样品的脱盐 | 第62页 |
| ·Tα1-TP5融合肽的酶切与回收 | 第62页 |
| ·Tα1-TP5融合肽的分子量测定 | 第62页 |
| 3 结果与分析 | 第62-66页 |
| ·Tα1-TP5融合肽表达量的测定 | 第63页 |
| ·Tα1-TP5融合肽亲和与脱盐 | 第63-64页 |
| ·融合肽的酶切及电泳鉴定 | 第64-65页 |
| ·Tα1-TP5融合肽的分子量测定 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| ·Tα1-TP5融合肽的分离纯化 | 第66-67页 |
| ·本实验表达系统优劣分析 | 第67-68页 |
| 5 小结 | 第68-69页 |
| 第四章 Tα1-TP5融合肽的二级结构研究 | 第69-82页 |
| 1 圆二色谱(circular dichroism,CD)测定 | 第69-74页 |
| ·仪器 | 第69页 |
| ·方法 | 第69页 |
| ·结果与分析 | 第69-73页 |
| ·Tα1的二级结构组成 | 第69-71页 |
| ·TP5的二级结构组成 | 第71-72页 |
| ·Tα1-TP5的二级结构组成 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-74页 |
| 2 傅立叶变换红外光谱(fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)测定 | 第74-81页 |
| ·材料 | 第74页 |
| ·试剂 | 第74页 |
| ·仪器 | 第74页 |
| ·方法 | 第74-75页 |
| ·波谱采集 | 第74页 |
| ·谱图分析 | 第74-75页 |
| ·结果与分析 | 第75-80页 |
| ·Tα1的FTIR图谱 | 第75-77页 |
| ·TP5的FTIR图谱 | 第77-78页 |
| ·Tα1-TP5融合肽的FTIR图谱 | 第78-80页 |
| ·讨论 | 第80-81页 |
| 3 结论 | 第81-82页 |
| 第五章 Tα1-TP5融合肽体外血浆半衰期的研究 | 第82-98页 |
| 1 材料与方法 | 第82-83页 |
| ·材料与试剂 | 第82页 |
| ·实验动物 | 第82页 |
| ·主要仪器设备 | 第82页 |
| ·样品采集与处理 | 第82-83页 |
| 2 结果与分析 | 第83-94页 |
| ·Tα1体外血浆半衰期的测定 | 第83-86页 |
| ·线形范围与检测灵敏度 | 第83页 |
| ·精密度实验 | 第83-84页 |
| ·回收率实验 | 第84-85页 |
| ·血药浓度 | 第85-86页 |
| ·TP5体外血浆半衰期的测定 | 第86-90页 |
| ·TP5线性范围与灵敏度检测 | 第86-87页 |
| ·精密度实验 | 第87-88页 |
| ·回收率实验 | 第88页 |
| ·血药浓度 | 第88-90页 |
| ·Tα1-TP5融合肽体外半衰期的测定 | 第90-94页 |
| ·Tα1-TP5线性范围与灵敏度检测 | 第90-91页 |
| ·精密度实验 | 第91-92页 |
| ·回收率实验 | 第92页 |
| ·血药浓度 | 第92-94页 |
| 3 讨论 | 第94-97页 |
| ·Tα1和Tα1-TP5的体外血浆半衰期测定 | 第94页 |
| ·TP5的体外血浆半衰期测定 | 第94-95页 |
| ·TP5类似物的半衰期 | 第95-97页 |
| 4 结论 | 第97-98页 |
| 第六章 Tα1-TP5融合肽的活性研究 | 第98-107页 |
| 1 材料 | 第98页 |
| ·主要试剂 | 第98页 |
| ·主要仪器设备 | 第98页 |
| ·实验动物 | 第98页 |
| 2 方法 | 第98-100页 |
| ·脾细胞增殖实验 | 第98-99页 |
| ·脾细胞悬液的制备 | 第98-99页 |
| ·CCK8法测定淋巴细胞增殖 | 第99页 |
| ·小鼠碳粒廓清试验 | 第99-100页 |
| ·小鼠血清中IL-2的含量测定 | 第100页 |
| ·统计学处理 | 第100页 |
| 3 结果 | 第100-105页 |
| ·Tα1-TP5融合肽对小鼠脾细胞增殖的影响 | 第100-101页 |
| ·Tα1-TP5融合肽对小鼠巨噬细胞的吞噬功能的影响 | 第101-103页 |
| ·Tα1-TP5融合肽对小鼠血清中IL-2水平的影响 | 第103-105页 |
| ·标准曲线的制作 | 第103页 |
| ·Tα1-TP5融合肽对小鼠血清中IL-2水平的影响 | 第103-105页 |
| 4 讨论 | 第105-106页 |
| ·Tα1-TP5融合肽对脾细胞增殖的影响 | 第105页 |
| ·Tα1-TP5融合肽对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响 | 第105-106页 |
| ·Tα1-TP5融合肽对IL-2分泌的影响 | 第106页 |
| 5 小结 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 博士期间发表的论文 | 第124-125页 |
| 外文论文 | 第125-139页 |
| 学位论文评阅及答辩情况 | 第139页 |
