| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 缩略词 | 第10-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 技术路线 | 第14-15页 |
| 第一部分 CLEC-2目的片段的获得 | 第15-21页 |
| 一、实验材料 | 第15页 |
| 二、主要仪器 | 第15页 |
| 三、主要试剂 | 第15页 |
| 四、主要溶液的配制 | 第15-16页 |
| 五、实验方法及步骤 | 第16-21页 |
| 1.人血小板总RNA的提取 | 第16-17页 |
| 2.RT-PCR | 第17-21页 |
| 第二部分 真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CLEC2的构建和鉴定 | 第21-29页 |
| 一、主要试剂 | 第21页 |
| 二、主要仪器 | 第21页 |
| 三、主要溶液的配制 | 第21-22页 |
| 四、实验方法及步骤 | 第22-29页 |
| 1.双酶切纯化的CLEC-2 PCR产物 | 第22-23页 |
| 2.双酶切pcDNA3.1(+) | 第23页 |
| 3.pcDNA3.1(+)-CLEC2重组DNA分子的构建 | 第23-29页 |
| 第三部分 pcDNA 3.1(+)-CLEC2重组体的表达 | 第29-33页 |
| 一、细胞株 | 第29页 |
| 二、主要仪器 | 第29页 |
| 三、主要试剂 | 第29页 |
| 四、主要溶液的配制 | 第29-30页 |
| 五、实验方法及步骤 | 第30-33页 |
| 1.CHO细胞的复苏与培养 | 第31页 |
| 2.重组体转染CHO细胞 | 第31-32页 |
| 3.G418筛选稳定株 | 第32-33页 |
| 第四部份 Western blot检测目的基因的表达 | 第33-38页 |
| 一、主要仪器 | 第33页 |
| 二、主要试剂 | 第33页 |
| 三、主要溶液的配制 | 第33-35页 |
| 四、实验方法及步骤 | 第35-38页 |
| 1.细胞裂解 | 第36页 |
| 2.Western blot蛋白样品的处理 | 第36页 |
| 3.Western blot具体步骤 | 第36-38页 |
| 结果 | 第38-49页 |
| 一、RT-PCR扩增目的基因 | 第38页 |
| 二、pcDNA3.1(+)-CLEC2重组体菌落PCR鉴定 | 第38-39页 |
| 三、pcDNA3.1(+)-CLEC2重组体的双酶切定 | 第39-40页 |
| 四、pcDNA3.1(+)-CLEC2重组体的测序及序列比对结果 | 第40-46页 |
| 五、重组质粒纯度及浓度测定结果 | 第46-47页 |
| 六、CHO细胞的转染与筛选 | 第47页 |
| 七、LEC-2目的蛋白在CHO细胞中的表达 | 第47-49页 |
| 讨论 | 第49-56页 |
| 一、关于表达载体的构建 | 第49-51页 |
| 二、真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-CLEC2的转染和表达 | 第51-55页 |
| 三、展望 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-59页 |
| 附录 | 第59-61页 |
| 文献综述 | 第61-68页 |
| 在校期间论文发表情况 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
