| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-35页 |
| 1 小菜蛾抗性研究概况 | 第12页 |
| ·小菜蛾的分布与为害 | 第12页 |
| ·小菜蛾的防治与抗药性 | 第12页 |
| 2 苏云金芽孢杆菌 | 第12-24页 |
| ·苏云金芽孢杆菌的研究简史 | 第12-13页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白及其基因的分类 | 第13-14页 |
| ·Bt杀虫蛋白的结构与功能 | 第14-16页 |
| ·晶体毒素(Cry)的结构和功能 | 第14-15页 |
| ·细胞裂解毒素(Cyt)的结构和功能 | 第15-16页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白的作用机制 | 第16-19页 |
| ·昆虫对Bt毒蛋白的抗性机制 | 第19-24页 |
| ·昆虫蛋白酶水解过程的改变 | 第19-20页 |
| ·中肠毒素受体的改变 | 第20-23页 |
| ·其它抗性机制 | 第23-24页 |
| 3 蛋白质组技术以及研究进展 | 第24-33页 |
| ·蛋白质组学的研究内容 | 第24页 |
| ·蛋白质组学研究技术 | 第24-30页 |
| ·蛋白质组的分离技术 | 第25-27页 |
| ·蛋白质组的鉴定技术以及功能分析 | 第27-29页 |
| ·蛋白质组数据库 | 第29-30页 |
| ·蛋白质组在昆虫研究中的应用 | 第30-33页 |
| ·蛋白质组在模式昆虫中的应用 | 第30-31页 |
| ·蛋白质组在非模式昆虫中的应用 | 第31-32页 |
| ·蛋白质组在农业昆虫对Bt毒素抗性机理中的应用 | 第32-33页 |
| 4 本实验研究的目的和意义 | 第33-35页 |
| 第二章 小菜蛾Cry1Ac抗性遗传互补与田间种群Cry1Ac抗性基因频率检测 | 第35-48页 |
| 1 材料与方法 | 第36-38页 |
| ·供试药剂 | 第36页 |
| ·供试昆虫 | 第36-37页 |
| ·生物测定 | 第37页 |
| ·SZBT品系和Cry1Ac-R品系抗性基因遗传互补检测 | 第37页 |
| ·抗性基因频率检测(F_1筛选法) | 第37-38页 |
| 2 结果和分析 | 第38-45页 |
| ·小菜蛾SZBT抗性品系的筛选和交互抗性 | 第38页 |
| ·SZBT品系和Cry1Ac-R品系抗性基因遗传互补 | 第38-42页 |
| ·小菜蛾田间种群对Cry1Ac抗性基因频率的检测(F_1筛选法) | 第42页 |
| ·小菜蛾Cry1Ac抗性基因频率与抗性倍数间的相关性 | 第42-45页 |
| 3 讨论 | 第45-48页 |
| ·交互抗性问题 | 第45页 |
| ·抗性基因频率检测方法 | 第45-46页 |
| ·抗性分子机理有待研究 | 第46-48页 |
| 第三章 小菜蛾中肠Cry1Ac结合蛋白的分离与鉴定 | 第48-70页 |
| 1 材料与方法 | 第49-57页 |
| ·供试药剂 | 第49页 |
| ·供试昆虫 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49-50页 |
| ·小菜蛾中肠BBMV的制备 | 第50页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第50页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第50页 |
| ·Cry1A毒素的生物素标记 | 第50-51页 |
| ·Cry1A毒素与小菜蛾中肠受体的配基结合 | 第51页 |
| ·双向电泳 | 第51-57页 |
| ·蛋白样品的纯化 | 第51-52页 |
| ·第一向等电聚焦 | 第52-53页 |
| ·第二向SDS-PAGE电泳 | 第53-55页 |
| ·胶体银染 | 第55页 |
| ·双向电泳配基结合实验 | 第55-56页 |
| ·凝胶图像分析与采点质谱测序 | 第56页 |
| ·银染PMF实验方法 | 第56-57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-66页 |
| ·SDS-PAGE电泳结果 | 第57-58页 |
| ·Cry1A毒素与小菜蛾中肠BBMV受体的配基结合 | 第58-60页 |
| ·小菜蛾中肠BBMV总蛋白双向凝胶电泳图谱的建立 | 第60-63页 |
| ·质谱鉴定Cry1Ac毒素的结合蛋白 | 第63页 |
| ·回交后代2D电泳图谱 | 第63-66页 |
| 3 讨论 | 第66-70页 |
| 第四章 小菜蛾PxAPN2基因沉默Cry1Ac敏感性影响 | 第70-100页 |
| 1 材料与方法 | 第71-78页 |
| ·供试药剂和设备 | 第71页 |
| ·供试昆虫 | 第71-72页 |
| ·中肠总RNA的制备 | 第72页 |
| ·模板cDNA的合成 | 第72-73页 |
| ·引物设计 | 第73页 |
| ·扩增小菜蛾PxAPN2基因全长引物的设计 | 第73页 |
| ·实时定量PCR引物的设计 | 第73页 |
| ·PCR反应 | 第73-74页 |
| ·PxAPN2基因全长PCR反应体系 | 第73-74页 |
| ·实时荧光定量PCR反应 | 第74页 |
| ·PCR产物的回收纯化、克隆及测序 | 第74-76页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第74-75页 |
| ·连接反应 | 第75页 |
| ·转化 | 第75页 |
| ·细菌扩大培养 | 第75-76页 |
| ·目标片段检测 | 第76页 |
| ·小菜蛾各品系间PxAPN2基因表达量比较 | 第76页 |
| ·实时荧光定量PCR反应效率的确定 | 第76页 |
| ·各个品系间PxAPN2基因表达量的比较 | 第76页 |
| ·双链dsRNA的合成 | 第76-77页 |
| ·线性DNA模板的引物与反应条件 | 第76-77页 |
| ·双链RNA的体外转录合成 | 第77页 |
| ·dsRNA喂食剂量的确定 | 第77-78页 |
| ·饲喂PxAPN2 dsRNA小菜蛾幼虫的生测 | 第78页 |
| 2 结果和分析 | 第78-96页 |
| ·抗性和敏感品系PxAPN2基因cDNA全长的克隆及序列比对 | 第78-87页 |
| ·PCR产物溶解曲线和扩增效率一致性分析 | 第87-90页 |
| ·品系间PxAPN2基因相对表达量比较 | 第90-91页 |
| ·dsRNA喂食剂量的确定 | 第91-92页 |
| ·PxAPN2基因沉默对Cry1Ac毒力的影响 | 第92页 |
| ·小菜蛾PxAPN2基因沉默后对Bt毒素交互抗性 | 第92-96页 |
| 3 讨论 | 第96-100页 |
| ·小菜蛾抗性和敏感品系PxAPN2核苷酸与氨基酸序列比对分析 | 第96页 |
| ·昆虫dsRNA的导入途径 | 第96-97页 |
| ·APN基因mRNA表达量变化与昆虫Bt抗性的关系 | 第97-100页 |
| 全文总结 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-122页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第122-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
