| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩略词 | 第13-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-36页 |
| 1 马铃薯甲虫是全球范围重要的鞘翅目害虫 | 第16-23页 |
| ·马铃薯甲虫的起源 | 第16-17页 |
| ·马铃薯甲虫的形态特征 | 第17-18页 |
| ·马铃薯甲虫分布区及寄主植物的扩大 | 第18-20页 |
| ·马铃薯甲虫的年生活史 | 第20-23页 |
| 2 马铃薯甲虫对我国的入侵 | 第23-25页 |
| ·马铃薯甲虫在我国的扩散及其潜在风险 | 第23-24页 |
| ·防控马铃薯甲虫扩散蔓延的对策措施 | 第24页 |
| ·进一步防控马铃薯甲虫向东扩散蔓延的关键措施 | 第24-25页 |
| 3 马铃薯甲虫长距离飞行与脯氨酸脱氢酶 | 第25-26页 |
| 4 RNA干扰的研究概况 | 第26-35页 |
| ·RNA干扰的研究的历史 | 第26-27页 |
| ·RNA干扰的分子机理 | 第27-32页 |
| ·转录后基因沉默机理 | 第28页 |
| ·RNA干扰的起始阶段 | 第28-29页 |
| ·RNA干扰的效应阶段 | 第29页 |
| ·RNA解旋酶蛋白家族 | 第29-30页 |
| ·沉默信号的传递与放大 | 第30-31页 |
| ·蛋白质翻译水平 | 第31页 |
| ·RNA介导的基因组甲基化 | 第31-32页 |
| ·系统性RNA干扰 | 第32-35页 |
| ·线虫中的系统性RNA干扰 | 第32-33页 |
| ·蜜蜂中的系统性RNA干扰 | 第33页 |
| ·果蝇中的细胞自主性RNA干扰 | 第33-34页 |
| ·人类中的系统性RNA干扰 | 第34页 |
| ·德国小蠊中的RNA干扰 | 第34页 |
| ·蝗虫中的RNA干扰 | 第34页 |
| ·其他昆虫中的RNA干扰 | 第34-35页 |
| 5 本文的研究目的 | 第35-36页 |
| 第二章 马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶基因全长克隆 | 第36-52页 |
| 1 材料与方法 | 第36-45页 |
| ·供试昆虫 | 第36-37页 |
| ·主要试剂和仪器设备 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37页 |
| ·总RNA的提取 | 第37-38页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第38-39页 |
| ·5'-RACE-Ready cDNA和3'-RACE-Ready cDNA的合成 | 第39-40页 |
| ·5'-RACE-Ready cDNA的合成 | 第39-40页 |
| ·3'-RACE-Ready cDNA的合成 | 第40页 |
| ·PCR引物 | 第40-41页 |
| ·PCR反应 | 第41-42页 |
| ·普通PCR反应体系及条件 | 第41-42页 |
| ·RACE PCR反应体系及条件 | 第42页 |
| ·常规分子克隆分子克隆 | 第42-45页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第42-43页 |
| ·连接反应 | 第43页 |
| ·连接产物的转化、单克隆 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的提取及检测 | 第44-45页 |
| ·序列测定与分析 | 第45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-50页 |
| ·马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶基因片段的克隆 | 第45-46页 |
| ·马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶的RACE全长克隆 | 第46-47页 |
| ·马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶cDNA全长序列及聚类树状图的构建 | 第47-50页 |
| 3 讨论 | 第50-52页 |
| 第三章 马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶基因表达分析 | 第52-60页 |
| 1 材料与方法 | 第53-55页 |
| ·end-to-end RT-PCR分别验证3个转录异型体 | 第53页 |
| ·半定量用模板的准备 | 第53-54页 |
| ·越冬前后马铃薯甲虫总RNA的提取 | 第53页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第53页 |
| ·越冬前后马铃薯甲虫DNA的提取 | 第53-54页 |
| ·3个转录异型体在越冬前后表达丰度的差异 | 第54-55页 |
| 2 结果与分析 | 第55-57页 |
| ·End-to-end PCR验证RACE结果 | 第55页 |
| ·3个转录异型体在越冬前后表达丰度的差异 | 第55-57页 |
| 3 讨论 | 第57-60页 |
| 第四章 类SID-1基因CDNA片段克隆与进化分析 | 第60-68页 |
| 1 材料与方法 | 第61-62页 |
| ·实验材料 | 第61页 |
| ·类sid-1基因的预测 | 第61页 |
| ·RACE PCR克隆类sid-1基因 | 第61页 |
| ·End-to-end验证拼接的RACE序列 | 第61-62页 |
| ·进化分析 | 第62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-66页 |
| ·类sid-1基因的生物信息预测结果 | 第62-63页 |
| ·RACE PCR结果 | 第63-64页 |
| ·End-to-end PCR验证RACE结果 | 第64-65页 |
| ·进化树分析 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-68页 |
| 第五章 应用微生物发酵技术获得马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶基因双链RNA初步研究 | 第68-74页 |
| 1 材料与方法 | 第69-70页 |
| ·实验材料 | 第69页 |
| ·双链RNA表达载体构建 | 第69页 |
| ·双链RNA在大肠杆菌中的表达 | 第69-70页 |
| ·双链RNA发酵条件的优化 | 第70页 |
| 2 结果与分析 | 第70-72页 |
| ·dsRNA表达载体构建 | 第70-71页 |
| ·双链RNA在大肠杆菌中的表达 | 第71-72页 |
| ·双链RNA发酵条件的优化 | 第72页 |
| 3 讨论 | 第72-74页 |
| 全文总结 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-86页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
