| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 缩略语表 | 第14-18页 |
| 第一章 前言 | 第18-41页 |
| ·ASGV的生物学和分子生物学特性 | 第18-24页 |
| ·ASGV的粒子形态和生物学特性 | 第18-20页 |
| ·ASGV的分子生物学特性 | 第20-24页 |
| ·ACLSV的生物学和分子生物学特性 | 第24-31页 |
| ·ACLSV的粒子形态和生物学特性 | 第24-25页 |
| ·ACLSV的株系分化 | 第25-27页 |
| ·ACLSV的分子生物学特性 | 第27-31页 |
| ·ASGV和ACLSV的检测 | 第31-33页 |
| ·ASGV和ACLSV的防治 | 第33-39页 |
| ·研究目的与意义 | 第39-41页 |
| 第二章 ASGV和ACLSV cp基因的原核表达及抗血清的制备 | 第41-74页 |
| ·前言 | 第41-42页 |
| ·材料和方法 | 第42-56页 |
| ·病毒来源、菌株和主要试剂 | 第42页 |
| ·引物 | 第42页 |
| ·植物病毒dsRNA的提取 | 第42-44页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第44页 |
| ·目的DNA片段的回收与纯化 | 第44-45页 |
| ·大肠杆菌热击感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·热击转化DH5α-感受态细胞 | 第45-46页 |
| ·质粒的小量提取 | 第46页 |
| ·ACLSV cp基因的克隆及序列测定和分析 | 第46-47页 |
| ·ACLSV cp基因的RT-PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·ACLSV cp基因的克隆和酶切鉴定 | 第47页 |
| ·序列测定与分析 | 第47页 |
| ·ASGV cp基因的克隆 | 第47-48页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第48-50页 |
| ·制备外源基因和表达载体 | 第48-49页 |
| ·连接、转化与鉴定 | 第49-50页 |
| ·目标基因的原核诱导表达 | 第50-52页 |
| ·重组原核表达载体转化受体菌BL21(DE3) | 第50页 |
| ·目标基因的诱导表达 | 第50页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第50-52页 |
| ·重组外壳蛋白的抗原性分析 | 第52页 |
| ·抗重组外壳蛋白多克隆抗体的制备 | 第52-54页 |
| ·重组外壳蛋白的大量诱导表达及纯化和定量 | 第52-53页 |
| ·免疫大耳白兔制备多克隆抗体 | 第53-54页 |
| ·血清的处理和保存 | 第54页 |
| ·抗血清效价的测定 | 第54页 |
| ·多克隆抗体的纯化及特异性分析 | 第54-55页 |
| ·纯化的多克隆抗体在病毒检测中的应用 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-71页 |
| ·ASGV cp基因的原核表达及抗血清的制备 | 第56-63页 |
| ·ASGV cp基因原核表达载体的构建 | 第56-57页 |
| ·ASGV cp基因的原核诱导表达 | 第57-58页 |
| ·ASGV cp基因原核表达产物的Western blot分析 | 第58-59页 |
| ·ASGV重组外壳蛋白的大量制备 | 第59-60页 |
| ·抗ASGV重组外壳蛋白的抗血清的效价 | 第60-61页 |
| ·抗ASGV重组外壳蛋白抗血清的纯化效果分析 | 第61-62页 |
| ·TBIA检测砂梨离体植株中的ASGV | 第62-63页 |
| ·ACLSV cp基因的克隆与序列分析 | 第63-64页 |
| ·ACLSV cp基因的PCR扩增与克隆 | 第63-64页 |
| ·分离物ACLSV-BD cp基因的序列分析 | 第64页 |
| ·分离物ACLSV-BD cp基因的原核表达及抗血清的制备 | 第64-71页 |
| ·分离物ACLSV-BD cp基因原核表达载体的构建 | 第64-66页 |
| ·分离物ACLSV-BD cp基因的原核诱导表达 | 第66-67页 |
| ·分离物ACLSV-BD cp基因原核表达产物的Western blot分析 | 第67-68页 |
| ·重组外壳蛋白的大量制备 | 第68页 |
| ·抗ACLSV重组外壳蛋白的抗血清的效价 | 第68-69页 |
| ·抗ACLSV重组外壳蛋白抗血清的纯化效果分析 | 第69-70页 |
| ·TBIA检测砂梨离体植株中的ACLSV | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-74页 |
| 第三章 ACLSV砂梨分离物的分子变异与其血清学多样性关系分析 | 第74-103页 |
| ·前言 | 第74-75页 |
| ·材料和方法 | 第75-80页 |
| ·材料 | 第75页 |
| ·果树样品 | 第75页 |
| ·草本指示植物 | 第75页 |
| ·引物 | 第75页 |
| ·方法 | 第75-80页 |
| ·摩擦接种 | 第75-76页 |
| ·TC-RT-PCT(Tube capture RT-PCR)检测 | 第76-77页 |
| ·6%聚丙烯酰胺凝胶电泳(6% PAGE) | 第77页 |
| ·总RNA的提取 | 第77-78页 |
| ·Nestd-RT-PCR扩增ACLSV cp基因 | 第78页 |
| ·ACLSV cp基因的克隆、鉴定和序列分析 | 第78-79页 |
| ·ACLSV cp基因原核表达载体的构建及其诱导表达 | 第79页 |
| ·ACLSV重组外壳蛋白的血清学多样性分析 | 第79-80页 |
| ·结果与分析 | 第80-100页 |
| ·ACLSV的TC-RT-PCR检测结果 | 第80页 |
| ·ACLSV砂梨分离物的生物学症状 | 第80-83页 |
| ·ACLSV cp基因的PCR扩增、克隆和RFLP分析 | 第83-87页 |
| ·ACLSV砂梨分离物cp基因的分子变异 | 第87-95页 |
| ·不同ACLSV分离物重组外壳蛋白的SDS-PAGE分析 | 第95-98页 |
| ·不同ACLSV分离物重组外壳蛋白的血清学多样性分析 | 第98-100页 |
| ·讨论 | 第100-103页 |
| ·砂梨样品中ACLSV的检测及其在草本指示植物上的症状表现 | 第100-101页 |
| ·ACLSV砂梨分离物cp基因的序列多样性 | 第101页 |
| ·ACLSV重组外壳蛋白的电泳迁移率与CP氨基酸组成的关系 | 第101-102页 |
| ·ACLSV重组外壳蛋白的血清学多样性与CP氨基酸位点的关系 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-118页 |
| 图版与说明 | 第118-123页 |
| 附录A:研究所用的植物材料及来源 | 第123-124页 |
| 附录B:主要试剂及溶液的配制 | 第124-132页 |
| 附录C:pMD 18-T载体信息 | 第132-133页 |
| 附录D:pET-28a(+)载体信息 | 第133-134页 |
| 附录E:研究生在读期间已发表的文章或会议论文 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135页 |
