| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-16页 |
| 英文缩略词(Abbreviation) | 第17-18页 |
| 引言 | 第18-21页 |
| 第一部分 不同浓度阿霉素对IMCD3细胞损伤的研究 | 第21-33页 |
| 1.实验材料 | 第21-22页 |
| 1.1 细胞来源 | 第21页 |
| 1.2 药物与试剂 | 第21页 |
| 1.3 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.实验主要试剂配制 | 第22-23页 |
| 2.1 PBS缓冲液的配制 | 第22页 |
| 2.2 完全培养基的配制 | 第22页 |
| 2.3 阿霉素的配制 | 第22页 |
| 2.4 MTT液的配制 | 第22页 |
| 2.5 细胞冻存液的配制 | 第22页 |
| 2.6 12%分离胶的配制(两块板) | 第22-23页 |
| 2.7 5%浓缩胶的配制(两块板) | 第23页 |
| 2.8 10×电泳缓冲液的配制 | 第23页 |
| 2.9 转移缓冲液的配制 | 第23页 |
| 2.10 封闭缓冲液的配制 | 第23页 |
| 2.11 一抗配制 | 第23页 |
| 2.12 二抗配制 | 第23页 |
| 3 IMCD3细胞培养 | 第23-24页 |
| 3.1 细胞复苏 | 第23-24页 |
| 3.2 细胞换液培养 | 第24页 |
| 3.3 细胞传代 | 第24页 |
| 3.4 细胞冻存 | 第24页 |
| 4.MTT法筛选不同阿霉素浓度对IMCD3细胞的生长增殖的影响 | 第24-25页 |
| 5 Annexin V/PI染色检测IMCD3细胞凋亡 | 第25-26页 |
| 6 Western blot检测不同浓度阿霉素诱导的IMCD3细胞AQP2蛋白的表达 | 第26-28页 |
| 6.1 蛋白样品的制备 | 第26页 |
| 6.2 灌胶和上样 | 第26-27页 |
| 6.3 电泳 | 第27页 |
| 6.4 转膜 | 第27页 |
| 6.5 一抗、二抗孵育 | 第27页 |
| 6.6 显影 | 第27-28页 |
| 6.7 结果分析 | 第28页 |
| 7 统计学处理 | 第28页 |
| 8 实验结果 | 第28-31页 |
| 8.1 形态学观察不同浓度的阿霉素对IMCD3细胞生长状态 | 第28页 |
| 8.2 MTT法检测不同浓度的阿霉素对IMCD3细胞的毒性作用 | 第28-29页 |
| 8.3 不同浓度阿霉素对IMCD3细胞凋亡的影响 | 第29-31页 |
| 8.4 不同浓度的阿霉素对IMCD3细胞AQP2蛋白表达的影响 | 第31页 |
| 9 讨论 | 第31-33页 |
| 第二部分 不同浓度当归芍药散对阿霉素诱导IMCD3细胞AQP2、Na~+-K~+-ATP酶蛋白表达的作用 | 第33-41页 |
| 1 实验材料及仪器 | 第33页 |
| 1.1 细胞株 | 第33页 |
| 1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 1.3 主要仪器 | 第33页 |
| 2.实验方法 | 第33-36页 |
| 2.1 细胞培养 | 第33页 |
| 2.2 当归芍药散提取液的制备 | 第33页 |
| 2.3 不同浓度当归芍药散对阿霉素损伤的IMCD3细胞生长增殖的影响(MTT法) | 第33-34页 |
| 2.4 Western blot检测不同浓度当归芍药散对阿霉素诱导的IMCD3细胞AQP2、Na~+-K~+-ATP酶蛋白表达的影响 | 第34-36页 |
| 3.统计学处理 | 第36页 |
| 4.实验结果 | 第36-38页 |
| 4.1 MTT法实验结果 | 第36页 |
| 4.2 Western blot法检测AQP2、Na~+-K~+-ATP酶蛋白的表达 | 第36-38页 |
| 5.讨论 | 第38-41页 |
| 第三部分 当归芍药散对阿霉素诱导IMCD3细胞的作用机制研究 | 第41-56页 |
| 1 实验材料及仪器 | 第41-43页 |
| 1.1 细胞株 | 第41页 |
| 1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 1.3 实验试剂配制 | 第41-43页 |
| 1.4 主要仪器 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-48页 |
| 2.1 细胞培养 | 第43-44页 |
| 2.2 ELISA法检测当归芍药散对阿霉素诱导的IMCD3细胞上清液cAMP水平的变化 | 第44-45页 |
| 2.3 当归芍药散对阿霉素诱导的IMCD3细胞Na~+-K~+-ATP酶活性检测 | 第45-47页 |
| 2.3.1 样本的前处理 | 第45-46页 |
| 2.3.2 酶促反应操作步骤 | 第46-47页 |
| 2.4 Western blot检测PKA,CREB,AQP2,Na~+-K~+-ATP酶蛋白的表达 | 第47-48页 |
| 2.4.1 蛋白样品的制备 | 第47页 |
| 2.4.2 灌胶和上样 | 第47页 |
| 2.4.3 电泳 | 第47页 |
| 2.4.4 转膜 | 第47-48页 |
| 2.4.5 一抗、二抗孵育 | 第48页 |
| 2.4.6 显影 | 第48页 |
| 2.4.7 结果分析 | 第48页 |
| 3 统计学处理 | 第48-49页 |
| 4 实验结果 | 第49-53页 |
| 4.1 ELISA法检测当归芍药散对阿霉素诱导的IMCD3细胞cAMP水平的变化 | 第49页 |
| 4.2 当归芍药散对阿霉素诱导的IMCD3细胞Na~+-K~+-ATP酶活性的影响 | 第49-50页 |
| 4.3 Western blot法检测PKA,CREB,AQP2的表达 | 第50-52页 |
| 4.4 Western blot法检测Na~+-K~+-ATP酶蛋白的表达 | 第52-53页 |
| 5.讨论 | 第53-56页 |
| 总结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 综述 | 第62-75页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 个人简历 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
