| 摘要 | 第10-11页 |
| ABSTRACT | 第11页 |
| 第一章 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 肝脏的葡萄糖代谢 | 第12页 |
| 1.2 肝脏的糖异生作用 | 第12-24页 |
| 1.2.1 肝脏糖异生作用的简介 | 第12-13页 |
| 1.2.2 糖异生底物对糖异生作用的调节 | 第13-15页 |
| 1.2.3 糖异生相关酶的活性和表达量对糖异生的调节 | 第15-21页 |
| 1.2.4 LKB1-SIK途径对糖异生的调节 | 第21-23页 |
| 1.2.5 对糖异生机制研究的重要意义 | 第23-24页 |
| 1.3 立题背景 | 第24-26页 |
| 第二章 材料和方法 | 第26-48页 |
| 2.1 分子克隆相关实验 | 第26-39页 |
| 2.1.1 表达质粒的构建 | 第26-34页 |
| 2.1.1.1 模板 | 第26页 |
| 2.1.1.2 引物的设计 | 第26页 |
| 2.1.1.3 PCR扩增目的片段 | 第26-27页 |
| 2.1.1.4 酶切载体 | 第27-28页 |
| 2.1.1.5 琼脂糖电泳分离并回收DNA | 第28页 |
| 2.1.1.6 LIC方法连接目的片段和载体 | 第28-29页 |
| 2.1.1.7 质粒DNA的提取 | 第29-33页 |
| 2.1.1.8 质粒DNA的酶切检测和测序鉴定 | 第33-34页 |
| 2.1.2 点突变质粒的构建 | 第34-35页 |
| 2.1.2.1 设计引物 | 第34页 |
| 2.1.2.2 突变反应 | 第34-35页 |
| 2.1.2.3 琼脂糖凝胶检测 | 第35页 |
| 2.1.3 慢病毒质粒的构建 | 第35-37页 |
| 2.1.4 腺病毒质粒的构建 | 第37-38页 |
| 2.1.5 小鼠基因型的鉴定 | 第38页 |
| 2.1.6 TRIzol法提取分离RNA | 第38-39页 |
| 2.2 蛋白质相关实验 | 第39-42页 |
| 2.2.1 免疫共沉淀 | 第39-40页 |
| 2.2.2 测定蛋白质的浓度(Bradford法) | 第40页 |
| 2.2.3 蛋白质的SDS-PAGE电泳与Western blotting分析 | 第40-42页 |
| 2.2.4 原核蛋白质的提取 | 第42页 |
| 2.3 细胞相关实验 | 第42-46页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第42-43页 |
| 2.3.2 细胞瞬时转染 | 第43页 |
| 2.3.3 原代肝细胞的分离 | 第43-44页 |
| 2.3.4 慢病毒和腺病毒的包装 | 第44-45页 |
| 2.3.5 磷酸化特异性抗体的制备 | 第45-46页 |
| 2.3.6 细胞免疫荧光实验 | 第46页 |
| 2.4 动物相关实验 | 第46-47页 |
| 2.4.1 免疫组化实验 | 第46-47页 |
| 2.5 统计分析 | 第47-48页 |
| 第三章 结果和讨论 | 第48-68页 |
| 3.1 结果 | 第48-66页 |
| 3.1.1 LAMTOR1肝脏特异性敲除的小鼠长时间饥饿后,血糖偏高 | 第48页 |
| 3.1.2 LAMTOR1肝脏特异性敲除的小鼠与野生型小鼠在饥饿过程中肝糖原水平没有出现差异 | 第48-49页 |
| 3.1.3 LAMTOR1肝脏特异性敲除的小鼠糖异生水平明显升高 | 第49-50页 |
| 3.1.4 LAMTOR1肝脏特异性敲除的小鼠糖异生底物没有差异 | 第50-51页 |
| 3.1.5 LAMTOR1肝脏特异性敲除小鼠的糖异生限速酶转录水平升高 | 第51-52页 |
| 3.1.6 LAMTOR1肝脏特异性敲除的小鼠并未出现胰岛素抵抗的表现 | 第52-55页 |
| 3.1.7 LAMTOR1肝脏特异性敲除的小鼠并未出现胰高血糖素敏感性增加的表现 | 第55-57页 |
| 3.1.8 LAMTOR1肝脏特异性敲除的小鼠通过LKB1-SIK信号通路提高糖异生水平物 | 第57-64页 |
| 3.1.9 LAMTOR1调节糖异生的临床意义 | 第64-66页 |
| 3.2 讨论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 图表索引 | 第76-77页 |
