| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 固有无序蛋白简介 | 第10-12页 |
| 1.1.1 固有无序蛋白的序列和结构特点 | 第10页 |
| 1.1.2 固有无序蛋白可参与生物体内的许多生理代谢活动 | 第10-12页 |
| 1.2 LEA蛋白是一类与植物逆境保护作用相关的重要蛋白质 | 第12-16页 |
| 1.2.1 LEA蛋白在自然界中的分布 | 第12-13页 |
| 1.2.2 LEA蛋白的分类 | 第13-15页 |
| 1.2.3 LEA蛋白的几种主要保护功能 | 第15-16页 |
| 1.3 LEA蛋白与DNA互作的相关性研究 | 第16-17页 |
| 1.4 大豆PM1蛋白的结构与功能 | 第17-18页 |
| 1.5 本实验的目的与意义 | 第18-19页 |
| 第2章 材料与方法 | 第19-31页 |
| 2.1 材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 菌株和载体 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要设备与仪器 | 第20-21页 |
| 2.2 主要试剂配制 | 第21-23页 |
| 2.2.1 培养基的配制 | 第21页 |
| 2.2.2 表达纯化蛋白所用试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.3 电泳所需试剂 | 第22-23页 |
| 2.3 方法 | 第23-31页 |
| 2.3.1 大豆PM1蛋白序列分析 | 第23页 |
| 2.3.2 重组菌PM1蛋白及其N端和C端蛋白的诱导表达 | 第23页 |
| 2.3.3 亲和层析分离、纯化PM1蛋白及PM1-N和PM1-C蛋白 | 第23-24页 |
| 2.3.4 BCA蛋白定量法检测蛋白浓度 | 第24页 |
| 2.3.5 PM1蛋白、PM1-N和PM1-C融合蛋白中His标签的去除 | 第24页 |
| 2.3.6 SDS-PAGE电泳 | 第24-25页 |
| 2.3.7 DNA的准备 | 第25-28页 |
| 2.3.8 紫外分光光度法测DNA浓度 | 第28页 |
| 2.3.9 凝胶阻滞实验(EMSA) | 第28-29页 |
| 2.3.10 滤膜结合实验(FilterBindingAssay) | 第29-30页 |
| 2.3.11 圆二色谱法(CD) | 第30-31页 |
| 第3章 结果 | 第31-54页 |
| 3.1 PM1蛋白的序列特性 | 第31-32页 |
| 3.2 PM1蛋白无序程度预测 | 第32-33页 |
| 3.3 PM1蛋白二级结构的预测 | 第33-34页 |
| 3.4 PM1蛋白及其PM1-N和PM1-C蛋白的表达纯化及SDS-PAGE电泳 | 第34-35页 |
| 3.5 凝胶阻滞实验,检测PM1蛋白与不同DNA的相互作用 | 第35-39页 |
| 3.5.1 检测PM1蛋白与不同长度基因的相互作用 | 第35-37页 |
| 3.5.2 检测PM1蛋白与环形/线形质粒的相互作用 | 第37-39页 |
| 3.6 凝胶阻滞实验,检测6种离子对PM1蛋白与DNA互作的影响 | 第39-43页 |
| 3.6.1 检测6种离子对PM1蛋白与基因互作的影响 | 第39-40页 |
| 3.6.2 检测6种离子对PM1蛋白与环形质粒互作的影响 | 第40-42页 |
| 3.6.3 检测6种离子对PM1蛋白与线形质粒DNA互作的影响 | 第42-43页 |
| 3.7 滤膜结合实验,检测PM1蛋白及其N/C端蛋白与离子和DNA的互作,及离子对其互作的影响 | 第43-48页 |
| 3.7.1 PM1蛋白+金属离子+DNA的相互作用及离子对其互作的影响 | 第43-44页 |
| 3.7.2 PM1-N蛋白+金属离子+DNA的互作及离子对其互作的影响 | 第44-46页 |
| 3.7.3 PM1-C蛋白+金属离子+DNA的互作及离子对其互作的影响 | 第46-48页 |
| 3.8 滤膜结合实验,检测PM1/PM1-N/PM1-C蛋白与DNA和金属离子互作及离子对其互作的影响 | 第48-52页 |
| 3.8.1 PM1蛋白+DNA+金属离子的相互作用及离子对其互作的影响 | 第48-49页 |
| 3.8.2 PM1-N蛋白+DNA+金属离子的相互作用及离子对其互作的影响 | 第49-51页 |
| 3.8.3 PM1-C蛋白+DNA+金属离子的相互作用及离子对其互作的影响 | 第51-52页 |
| 3.9 DNA对PM1/PM1-N/PM1-C蛋白二级结构的影响 | 第52-54页 |
| 第4章 讨论 | 第54-56页 |
| 4.1 大豆PM1蛋白与DNA分子的结合属于非特异性结合 | 第54页 |
| 4.2 离子Ni~(2+)和Cu~(2+)可影响PM1蛋白与DNA的结合 | 第54-56页 |
| 第5章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 附录 | 第64-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
