| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-24页 |
| 1.1 鞘氨醇单胞菌 | 第11页 |
| 1.2 鞘氨醇胶 | 第11-12页 |
| 1.3 威兰胶 | 第12-20页 |
| 1.3.1 威兰胶的结构 | 第12-13页 |
| 1.3.2 威兰胶的生物合成途径 | 第13-16页 |
| 1.3.3 威兰胶的性质 | 第16页 |
| 1.3.4 威兰胶的应用 | 第16-18页 |
| 1.3.5 威兰胶菌株及发酵 | 第18-20页 |
| 1.4 融合PCR技术 | 第20-22页 |
| 1.4.1 PCR技术 | 第20-21页 |
| 1.4.2 PCR技术的发展及应用 | 第21页 |
| 1.4.3 融合PCR技术 | 第21-22页 |
| 1.5 选题意义及研究内容 | 第22-24页 |
| 1.5.1 选题意义 | 第22-23页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 关键酶过表达菌株的构建 | 第24-41页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第24-25页 |
| 2.2.2 主要药品 | 第25页 |
| 2.2.3 培养基和溶液 | 第25-26页 |
| 2.2.4 工具酶和试剂盒 | 第26页 |
| 2.2.5 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法与步骤 | 第27-33页 |
| 2.3.1 Sphingomonas sp.WG和 E.coli DH5α菌株的活化 | 第27页 |
| 2.3.2 Sphingomonas sp.WG基因组和质粒的提取 | 第27页 |
| 2.3.3 引物设计 | 第27-28页 |
| 2.3.4 关键酶UgpG和 WelB基因ugpG和 welB的克隆 | 第28-29页 |
| 2.3.5 限制性酶切、纯化及连接反应 | 第29页 |
| 2.3.6 E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2.3.7 转化E.coli DH5α | 第30页 |
| 2.3.8 重组子鉴定 | 第30页 |
| 2.3.9 重组质粒提取 | 第30-31页 |
| 2.3.10 三亲杂交转化Sphingomonas sp.WG菌株 | 第31页 |
| 2.3.11 电转化Sphingomonas sp.WG菌株 | 第31-32页 |
| 2.3.12 Sphingomonas sp.WG菌株重组子鉴定 | 第32-33页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第33-40页 |
| 2.4.1 UgpG和 WelB基因ugpG和 welB的扩增 | 第33-34页 |
| 2.4.2 pBBR1MCS-3-ugpG/welB重组质粒的构建及鉴定 | 第34-37页 |
| 2.4.3 含pBBR1MCS-3-ugpG/welB的 Sphingomonas sp.WG重组菌株鉴定.. | 第37-40页 |
| 2.5 本章小结 | 第40-41页 |
| 第三章 关键酶对威兰胶合成的影响 | 第41-58页 |
| 3.1 引言 | 第41页 |
| 3.2 实验材料 | 第41-43页 |
| 3.2.1 菌株 | 第41页 |
| 3.2.2 仪器与设备 | 第41页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第41-42页 |
| 3.2.4 培养基和溶液 | 第42页 |
| 3.2.5 常用溶液的配置 | 第42-43页 |
| 3.3 实验方法与步骤 | 第43-48页 |
| 3.3.1 培养方法 | 第43-44页 |
| 3.3.2 发酵参数测定 | 第44-45页 |
| 3.3.3 威兰胶粗品的分离纯化 | 第45页 |
| 3.3.4 多糖结构的初步表征 | 第45-48页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第48-57页 |
| 3.4.1 野生菌株与过关键酶表达菌株的发酵参数测定 | 第48-51页 |
| 3.4.2 威兰胶粗品的分离纯化 | 第51-52页 |
| 3.4.3 多糖样品的结构表征 | 第52-57页 |
| 3.5 小结 | 第57-58页 |
| 第四章 表达载体pBBRtac3 的构建及应用 | 第58-83页 |
| 4.1 引言 | 第58页 |
| 4.2 实验材料 | 第58-60页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第58页 |
| 4.2.2 主要药品 | 第58-59页 |
| 4.2.3 培养基和溶液 | 第59-60页 |
| 4.2.4 工具酶和试剂盒 | 第60页 |
| 4.2.5 主要仪器 | 第60页 |
| 4.3 实验方法与步骤 | 第60-71页 |
| 4.3.1 表达载体pBBRtac3 的构建 | 第60-67页 |
| 4.3.2 表达载体pBBRtac3 在大肠杆菌中表达检测 | 第67-71页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第71-82页 |
| 4.4.1 表达载体pBBRtac3 的构建 | 第71-76页 |
| 4.4.2 表达载体pBBRtac3 的有效性验证 | 第76-82页 |
| 4.5 本章小结 | 第82-83页 |
| 第五章 结论与展望 | 第83-85页 |
| 5.1 结论 | 第83-84页 |
| 5.2 展望 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-90页 |
| 附录 | 第90-93页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
