| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 符号与缩略语 | 第13-14页 |
| 第一篇 文献综述 | 第14-28页 |
| 第一章 禽Ⅰ群腺病毒的研究进展 | 第14-28页 |
| 1 病原学 | 第14-16页 |
| 1.1 分类 | 第14页 |
| 1.2 形态学及理化特性 | 第14-15页 |
| 1.3 腺病毒的增殖 | 第15页 |
| 1.4 腺病毒的感染与复制 | 第15-16页 |
| 2 主要蛋白 | 第16-17页 |
| 2.1 结构蛋白 | 第16-17页 |
| 2.1.1 六邻体 | 第16-17页 |
| 2.1.2 五邻体和纤维蛋白 | 第17页 |
| 2.2 非结构蛋白 | 第17页 |
| 3 流行病学 | 第17-18页 |
| 4 临床症状与病理变化 | 第18页 |
| 5 预防与治疗 | 第18-19页 |
| 6 诊断方法 | 第19-23页 |
| 6.1 病毒的分离鉴定 | 第19页 |
| 6.2 血清学诊断 | 第19-20页 |
| 6.2.1 中和试验 | 第19页 |
| 6.2.2 琼脂扩散试验 | 第19-20页 |
| 6.2.3 间接免疫荧光试验 | 第20页 |
| 6.2.4 酶联免疫吸附试验 | 第20页 |
| 6.3 分子生物学诊断 | 第20-23页 |
| 6.3.1 聚合酶链式反应 | 第20页 |
| 6.3.2 套式PCR | 第20-21页 |
| 6.3.3 实时定量PCR | 第21页 |
| 6.3.4 LAMP环介导等温核酸扩增技术 | 第21-23页 |
| 参考文献 | 第23-28页 |
| 第二篇 试验研究 | 第28-72页 |
| 第二章 禽Ⅰ群腺病毒PCR检测方法的建立及LAMP检测方法的建立和优化 | 第28-42页 |
| 1 材料 | 第29页 |
| 1.1 试剂 | 第29页 |
| 1.2 试验器材 | 第29页 |
| 2 试验方法 | 第29-32页 |
| 2.1 病毒的扩增 | 第29-30页 |
| 2.2 病毒基因组的提取 | 第30页 |
| 2.3 传统PCR检测方法的建立 | 第30-31页 |
| 2.3.1 引物的设计与合成 | 第30页 |
| 2.3.2 PCR反应 | 第30页 |
| 2.3.3 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第30页 |
| 2.3.4 PCR反应的特异性试验 | 第30-31页 |
| 2.3.5 PCR反应的敏感性试验 | 第31页 |
| 2.4 禽腺病毒LAMP检测方法的建立及优化 | 第31-32页 |
| 2.4.1 禽腺病毒LAMP引物设计 | 第31页 |
| 2.4.2 禽腺病毒LAMP检测方法的建立及优化 | 第31页 |
| 2.4.3 LAMP的特异性试验 | 第31-32页 |
| 2.4.4 LAMP敏感性试验 | 第32页 |
| 2.4.5 LAMP试验dNTPs浓度的优化 | 第32页 |
| 2.4.6 LAMP试验Mg~(2+)浓度的优化 | 第32页 |
| 2.4.7 LAMP试验甜菜碱浓度的优化 | 第32页 |
| 3 结果 | 第32-39页 |
| 3.1 PCR方法的建立 | 第32-33页 |
| 3.2 PCR检测方法的特异性试验 | 第33-34页 |
| 3.3 PCR检测方法的敏感性 | 第34页 |
| 3.4 LAMP检测方法的建立 | 第34-35页 |
| 3.5 LAMP试验的优化 | 第35-37页 |
| 3.5.1 dNTPs浓度的优化 | 第35页 |
| 3.5.2 Mg~(2+)浓度的优化 | 第35-36页 |
| 3.5.3 甜菜碱浓度的优化 | 第36-37页 |
| 3.6 LAMP特异性试验 | 第37页 |
| 3.7 LAMP敏感性试验 | 第37-38页 |
| 3.8 对FAdV临床样品的检测 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-42页 |
| 第三章 禽Ⅰ群腺病毒hexon蛋白的原核表达及鸡抗hexon蛋白血清制备 | 第42-58页 |
| 1 材料 | 第43页 |
| 1.1 质粒和试剂 | 第43页 |
| 1.2 试验器材 | 第43页 |
| 1.3 试验动物 | 第43页 |
| 2 试验方法 | 第43-51页 |
| 2.1 病毒增殖 | 第43-44页 |
| 2.2 病毒基因组的提取 | 第44页 |
| 2.3 hexon基因克隆和扩增 | 第44-46页 |
| 2.3.1 引物的设计及合成 | 第44页 |
| 2.3.2 PCR反应 | 第44页 |
| 2.3.3 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第44-45页 |
| 2.3.4 PCR产物的回收与连接 | 第45页 |
| 2.3.5 大肠杆菌DH5α感受态细菌的制备及转化 | 第45页 |
| 2.3.6 重组质粒的小量提取和酶切鉴定 | 第45-46页 |
| 2.3.7 质粒PET-32a的扩增及提取 | 第46页 |
| 2.3.8 质粒PET-32a的酶切 | 第46页 |
| 2.4 重组原核表达质粒PET-32a-hexon的构建 | 第46-47页 |
| 2.4.1 重组质粒的连接 | 第46-47页 |
| 2.4.2 BL21感受态细胞的制备 | 第47页 |
| 2.4.3 重组质粒转化BL21感受态细胞 | 第47页 |
| 2.5 重组质粒PET-32a-hexon的鉴定 | 第47-48页 |
| 2.5.1 重组质粒的酶切鉴定 | 第47-48页 |
| 2.5.2 重组质粒的PCR鉴定 | 第48页 |
| 2.6 重组质粒PET-32a-hexon的基因序列测定 | 第48页 |
| 2.7 hexon基因在BL21中的诱导表达和检测 | 第48-49页 |
| 2.8 原核表达hexon蛋白的可溶性检测 | 第49页 |
| 2.9 原核表达hexon蛋白的复性 | 第49-50页 |
| 2.9.1 原核表达hexon蛋白包涵体的制备 | 第49页 |
| 2.9.2 原核表达hexon蛋白包涵体的复性 | 第49页 |
| 2.9.3 Western-blot检测 | 第49-50页 |
| 2.10 原核表达hexon蛋白鸡多抗血清的制备 | 第50-51页 |
| 3 结果 | 第51-56页 |
| 3.1 hexon基因的PCR扩增结果 | 第51页 |
| 3.2 PCR筛选阳性菌株 | 第51-52页 |
| 3.3 重组质粒PET-32a-hexon双酶切鉴定结果 | 第52-53页 |
| 3.4 重组质粒PET-32a-hexon的测序结果 | 第53-54页 |
| 3.5 重组质粒PET-32a-hexon在BL21中的表达鉴定 | 第54-55页 |
| 3.6 hexon蛋白的Western-blot | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-58页 |
| 第四章 hexon间接ELISA抗体检测方法的建立及其优化 | 第58-68页 |
| 1 材料 | 第58-61页 |
| 1.1 血清 | 第58-59页 |
| 1.2 主要试剂 | 第59页 |
| 1.3 间接ELISA方法的操作程序 | 第59页 |
| 1.4 间接ELISA方法的建立和优化 | 第59-61页 |
| 1.4.1 抗原最适包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第59页 |
| 1.4.2 重组抗原包被条件的确定 | 第59-60页 |
| 1.4.3 最佳封闭时间的确定 | 第60页 |
| 1.4.4 血清最适作用时间的选择 | 第60页 |
| 1.4.5 酶标二抗最适作用时间的选择 | 第60页 |
| 1.4.6 确定底物显色时间 | 第60页 |
| 1.4.7 间接ELISA方法阴阳性临界值的确定 | 第60页 |
| 1.4.8 特异性试验 | 第60-61页 |
| 1.4.9 重复性试验 | 第61页 |
| 2 结果 | 第61-66页 |
| 2.1 间接诊断方法最佳工作条件的确定 | 第61-66页 |
| 2.1.1 抗原最适包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第61-62页 |
| 2.1.2 包被条件的确定 | 第62-63页 |
| 2.1.3 封闭时间的确定 | 第63页 |
| 2.1.4 待检血清最佳反应时间的确定 | 第63页 |
| 2.1.5 酶标二抗最佳反应时间确定 | 第63-64页 |
| 2.1.6 底物TMB最佳显色时间的确定 | 第64页 |
| 2.1.7 重复性试验 | 第64页 |
| 2.1.8 间接ELISA反应程序确定 | 第64-65页 |
| 2.1.9 间接ELISA阴、阳性临界值的确定 | 第65页 |
| 2.1.10 特异性试验 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-68页 |
| 第五章 邳州市部分肉鸡养殖场鸡腺病毒抗体水平调查 | 第68-72页 |
| 1 材料 | 第68页 |
| 1.1 血清 | 第68页 |
| 1.2 仪器与试剂 | 第68页 |
| 2 方法 | 第68-69页 |
| 3 结果 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-72页 |
| 全文总结 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
