| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1. 引言 | 第15-34页 |
| 1.1 白血病 | 第15-21页 |
| 1.1.1 白血病分类 | 第15-16页 |
| 1.1.2 白血病的发病原因 | 第16页 |
| 1.1.3 白血病治疗方法 | 第16-18页 |
| 1.1.4 白血病分化治疗 | 第18-21页 |
| 1.2 细胞自噬 | 第21-25页 |
| 1.2.1 细胞自噬的定义 | 第21-22页 |
| 1.2.2 细胞自噬分类 | 第22-23页 |
| 1.2.3 细胞自噬研究方法 | 第23-24页 |
| 1.2.4 细胞自噬与白血病 | 第24-25页 |
| 1.3 细胞内活性氧自由基 | 第25-27页 |
| 1.3.1 细胞内活性氧自由基定义 | 第25-26页 |
| 1.3.2 活性氧与自噬 | 第26页 |
| 1.3.3 活性氧与细胞分化 | 第26-27页 |
| 1.4 原癌基因c-myc | 第27-30页 |
| 1.4.1 c-myc基因的结构 | 第27-28页 |
| 1.4.2 c-myc基因的功能 | 第28-29页 |
| 1.4.3 c-MYC抑制细胞分化 | 第29-30页 |
| 1.5 汉防己甲素 | 第30-32页 |
| 1.5.1 汉防己甲素的特性 | 第30页 |
| 1.5.2 汉防己甲素的作用 | 第30-31页 |
| 1.5.3 汉防己甲素的抗肿瘤作用 | 第31-32页 |
| 1.6 本研究的思路和意义 | 第32-34页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第34-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-37页 |
| 2.1.1 细胞株和菌株 | 第34页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第34页 |
| 2.1.3 药品器材及试剂 | 第34-35页 |
| 2.1.4 抗体 | 第35页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第35-36页 |
| 2.1.6 主要试剂的配制 | 第36-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-52页 |
| 2.2.1 细胞复苏、传代及冻存 | 第37-38页 |
| 2.2.2 加药处理细胞实验 | 第38页 |
| 2.2.3 Western Blot实验 | 第38-41页 |
| 2.2.4 细胞增殖检测 | 第41页 |
| 2.2.5 细胞活力检测(台盼蓝拒染法) | 第41页 |
| 2.2.6 细胞周期检测(PI单染) | 第41页 |
| 2.2.7 细胞凋亡检测(Annexin V-PI双染) | 第41-42页 |
| 2.2.8 流式检测细胞分化 | 第42页 |
| 2.2.9 Wright-Giemsa染色检测 | 第42页 |
| 2.2.10 NBT(硝基四唑氮蓝)还原实验 | 第42-43页 |
| 2.2.11 吖啶橙染色实验 | 第43页 |
| 2.2.12 感受态菌株DH5α制备 | 第43-44页 |
| 2.2.13 感受态转化 | 第44页 |
| 2.2.14 质粒提取 | 第44-45页 |
| 2.2.15 细胞转染 | 第45页 |
| 2.2.16 GFP-LC3荧光点聚集实验 | 第45页 |
| 2.2.17 ptf-LC3双荧光实验 | 第45-46页 |
| 2.2.18 流式检测细胞内ROS水平 | 第46页 |
| 2.2.19 RNA提取 | 第46-47页 |
| 2.2.20 RNA反转 | 第47页 |
| 2.2.21 定量PCR | 第47页 |
| 2.2.22 稳定过表c-MYC细胞系构建 | 第47-48页 |
| 2.2.23 动物实验 | 第48-50页 |
| 2.2.24 AML病人血样分离 | 第50-51页 |
| 2.2.25 统计学分析 | 第51-52页 |
| 3. 实验结果 | 第52-112页 |
| 3.1 汉防己甲素抑制血癌细胞增殖 | 第52-54页 |
| 3.2 汉防己甲素对血癌细胞活力影响 | 第54-57页 |
| 3.3 汉防己甲素促进血癌细胞分化 | 第57-63页 |
| 3.3.1 汉防己甲素诱导血癌细胞形态改变 | 第58-59页 |
| 3.3.2 汉防己甲素诱导血癌细胞硝基四氮唑蓝(NBT)还原能力改变 | 第59页 |
| 3.3.3 汉防己甲素诱导K562、THP-1细胞CD14及CD11b表达 | 第59-63页 |
| 3.4 汉防己甲素能够诱导血癌细胞发生自噬 | 第63-69页 |
| 3.4.1 Western blot检测汉防己甲素诱导细胞自噬 | 第64-65页 |
| 3.4.2 吖啶橙荧光染色显示汉防己甲素对细胞自噬具有一定影响 | 第65-67页 |
| 3.4.3 GFP-LC3荧光点聚集检测汉防己甲素诱导细胞自噬的发生 | 第67页 |
| 3.4.4 LC3-Ⅱ转化检测汉防己甲素诱导细胞自噬流的产生 | 第67-68页 |
| 3.4.5 ptf-LC3双荧光检测细胞自噬流的流通 | 第68-69页 |
| 3.5 汉防己甲素促进血癌细胞分化与诱导自噬相关 | 第69-76页 |
| 3.5.1 3-MA抑制汉防己甲素诱导的血癌细胞自噬 | 第69-71页 |
| 3.5.2 抑制细胞自噬能够抑制由汉防己甲素诱导的血癌细胞分化 | 第71-76页 |
| 3.6 汉防己甲素激活血癌细胞中ROS水平 | 第76-81页 |
| 3.6.1 汉防己甲素促进K562、THP-1细胞内ROS的累积 | 第76-77页 |
| 3.6.2 汉防己甲素通过激活细胞中ROS诱导血癌细胞自噬 | 第77-80页 |
| 3.6.3 抑制自噬对汉防己甲素激活的ROS水平没有影响 | 第80-81页 |
| 3.7 汉防己甲素通过激活细胞中ROS诱导血癌细胞分化 | 第81-83页 |
| 3.8 汉防己甲素促进细胞分化与原癌基因c-myc相关 | 第83-90页 |
| 3.8.1 Western blot检测汉防己甲素抑制c-MYC蛋白表达 | 第83-84页 |
| 3.8.2 荧光定量PCR分析c-myc转录水平 | 第84页 |
| 3.8.3 构建稳定过表c-MYC细胞系 | 第84-85页 |
| 3.8.4 过表c-MYC可以抑制汉防己甲素诱导的细胞分化 | 第85-88页 |
| 3.8.5 抑制c-MYC表达可以促进汉防己甲素诱导的细胞分化 | 第88-90页 |
| 3.9 c-MYC表达与细胞自噬以及ROS累积的关系 | 第90-93页 |
| 3.9.1 汉防己甲素抑制c-MYC表达可能与细胞自噬相关 | 第90-92页 |
| 3.9.2 汉防己甲素抑制c-MYC表达与ROS累积无关 | 第92-93页 |
| 3.10 汉防己甲素在动物体内诱导血癌细胞分化 | 第93-100页 |
| 3.10.1 汉防己甲素抑制THP-1 vector细胞移植瘤的生长 | 第93-94页 |
| 3.10.2 汉防己甲素对THP-1 c-MYC细胞移植瘤的生长抑制不明显 | 第94-95页 |
| 3.10.3 汉防己甲素在体内对动物毒性较低 | 第95-96页 |
| 3.10.4 汉防己甲素诱导动物体内肿瘤ROS水平升高 | 第96-97页 |
| 3.10.5 汉防己甲素处理诱导肿瘤组织中相关蛋白的变化 | 第97-100页 |
| 3.11 汉防己甲素对AML病人细胞影响 | 第100-107页 |
| 3.11.1 汉防己甲素对AML病人细胞具有明显杀伤作用 | 第100-102页 |
| 3.11.2 汉防己甲素诱导AML病人细胞分化 | 第102-103页 |
| 3.11.3 汉防己甲素能够影响AML病人细胞自噬水平且与分化相关 | 第103-105页 |
| 3.11.4 汉防己甲素促进AML病人细胞内ROS的累积且与分化相关 | 第105-106页 |
| 3.11.5 汉防己甲素抑制AML病人细胞c-MYC蛋白表达 | 第106-107页 |
| 3.12 汉防己甲素对正常造血细胞的作用检测 | 第107-111页 |
| 3.12.1 汉防己甲素对正常造血祖细胞没有杀伤作用 | 第107-109页 |
| 3.12.2 汉防己甲素能够影响正常造血祖细胞的自噬 | 第109-110页 |
| 3.12.3 汉防己甲素对正常造血祖细胞分化没有影响 | 第110-111页 |
| 3.13 汉防己甲素诱导血癌细胞分化通路图 | 第111-112页 |
| 4. 讨论 | 第112-115页 |
| 4.1 诱导分化治疗白血病的优势与不足 | 第112-113页 |
| 4.2 汉防己甲素诱导的自噬与分化密切相关 | 第113页 |
| 4.3 汉防己甲素临床治疗白血病的前景及研究展望 | 第113-115页 |
| 参考文献 | 第115-128页 |
| 缩略词表 | 第128-130页 |
| 博士期间发表的论文 | 第130-131页 |
| 致谢 | 第131页 |
