摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
引言 | 第10-16页 |
1 人4型腺病毒ITR突变株的构建 | 第16-37页 |
1.1 材料与方法 | 第16-23页 |
1.1.1 实验仪器设备与主要试剂 | 第16-17页 |
1.1.2 菌株、质粒、细胞株与病毒株 | 第17页 |
1.1.3 培养基及相关试剂配制 | 第17-18页 |
1.1.4 菌株、细胞株及病毒株的培养 | 第18-19页 |
1.1.5 感染性克隆pBR-Ad4-ITRmut的构建 | 第19-22页 |
1.1.6 脂质体介导的DNA转染 | 第22-23页 |
1.1.7 Western bolt分析其六邻体蛋白的表达 | 第23页 |
1.1.8 透射电子显微镜观察腺病毒粒子 | 第23页 |
1.1.9 生长曲线绘制 | 第23页 |
1.2 结果与分析 | 第23-35页 |
1.2.1 穿梭质粒pBR-ITRmut的构建 | 第23-26页 |
1.2.2 骨架质粒pBR-Ad4-ITRmut鉴定 | 第26-29页 |
1.2.3 腺病毒基因组的释放 | 第29页 |
1.2.4 脂质体介导的DNA转染293T细胞 | 第29-33页 |
1.2.5 Western bolt分析其六邻体蛋白的表达 | 第33页 |
1.2.6 透射电子显微镜观察腺病毒粒子 | 第33-34页 |
1.2.7 复制速率的比较 | 第34-35页 |
1.3 讨论 | 第35-36页 |
1.4 总结 | 第36-37页 |
2 人4/7型腺病毒中和表位嵌合重组腺病毒候选疫苗株的构建 | 第37-53页 |
2.1 材料与方法 | 第37-42页 |
2.1.1 实验仪器设备与主要试剂 | 第37页 |
2.1.2 质粒、菌株、细胞株及病毒株 | 第37-38页 |
2.1.3 培养基及相关试剂配制 | 第38页 |
2.1.4 菌株、细胞株及病毒株的培养 | 第38页 |
2.1.5 人4型/7型腺病毒中和表位嵌合的双价重组腺病毒载体的构建 | 第38-41页 |
2.1.6 脂质体介导的重组腺病毒DNA转染293T细胞 | 第41页 |
2.1.7 Western bolt分析 | 第41页 |
2.1.8 细胞免疫荧光实验 | 第41-42页 |
2.1.9 透射电子显微镜观察腺病毒粒子 | 第42页 |
2.1.10 复制速率检测 | 第42页 |
2.1.11 CCK-8试验检测毒力作用 | 第42页 |
2.2 结果与分析 | 第42-51页 |
2.2.1 重组腺病毒载体pBR-Ad4ITRmut-Ad7E3的构建 | 第42-44页 |
2.2.2 脂质体介导的重组腺病毒DNA转染293T细胞 | 第44-48页 |
2.2.3 Western bolt分析Hexon的表达 | 第48-49页 |
2.2.4 透射电子显微镜观察腺病毒粒子 | 第49页 |
2.2.5 细胞免疫荧光实验检测中和表位E3的表达 | 第49-50页 |
2.2.6 Ad4ITRmut-Ad7E3生长曲线绘制 | 第50-51页 |
2.2.7 CCK-8试验检测结果分析 | 第51页 |
2.3 讨论 | 第51-52页 |
2.4 总结 | 第52-53页 |
3 双价腺病毒候选疫苗株Ad4ITRmut-Ad7E3免疫效果评价 | 第53-65页 |
3.1 材料与方法 | 第53-56页 |
3.1.1 实验仪器设备与主要试剂 | 第53页 |
3.1.2 细胞株与病毒株 | 第53页 |
3.1.3 培养基及相关试剂配制 | 第53-54页 |
3.1.4 细胞株及病毒株的培养 | 第54页 |
3.1.5 实验动物 | 第54页 |
3.1.6 动物免疫及分组 | 第54页 |
3.1.7 腺病毒大量扩增 | 第54-55页 |
3.1.8 腺病毒的纯化 | 第55-56页 |
3.1.9 腺病毒滴度测定 | 第56页 |
3.1.10 抗体中和试验 | 第56页 |
3.2 结果与分析 | 第56-63页 |
3.2.1 腺病毒纯化及滴度测定 | 第56-58页 |
3.2.2 免疫剂量的选择 | 第58页 |
3.2.3 血清抗体中和能力分析 | 第58-61页 |
3.2.4 小鼠攻毒试验 | 第61-63页 |
3.3 讨论 | 第63页 |
3.4 总结 | 第63页 |
3.5 结论 | 第63-65页 |
参考文献 | 第65-68页 |
附录1 缩略语表(Abbreviations) | 第68-69页 |
附录2 个人情况简介 | 第69-70页 |
致谢 | 第70页 |